TY - JOUR ID - TI - EXTRACTION AND PURIFICATION OF PROTEASE FROM LOCALLY OKRA PODS (ABELMOSCHUS ESCULENTUS) استخلاص وتنقية بروتييز قرنات الباميا Abelmoschus esculentus المحلية AU - A. W. Mohi Rayitali84@gmail.com AU - Kh. A. Shakir dr_khalida55@yahoo.com PY - 2015 VL - 46 IS - 3 SP - 426 EP - 432 JO - Iraqi Journal of Agricultural Sciences مجلة العلوم الزراعية العراقية SN - 00750530 24100862 AB - This study aimed to extract, purify, and characterize the protease of local Okra Abelmoschus esculentus pods. The extraction process was conducted using ten extraction solutions with different pH and ionic strength values. Phosphate buffer solution with (pH 7, 0.05M, containing 2% sodium chloride) gave the highest activity which was (7.2 Unit/ml) as compared to other solutions, which ranged from 0.8-5.9 Unit/ml. The extracted enzyme purified by several stages. Being, precipitation by gradual addition of Ammonium sulphate from 20 to 85% saturation, then the precipitated enzyme was dialyzed and fractionated through DEAE-Cellulose (22X1.1cm), the enzymic fractions were pooled. The specific activity, purification fold and the enzyme yield values were 21.52 units/mg, 1.24 and 82.83% respectively. For further purification the enzyme fractions applied to G-75 Sephadex column (65x 1.5cm), the specific activity, enzyme yield and purification fold value were 98.82Unit/mg, 46.70%, 5.1, respectively .Electrophoresis analysis in the absence of SDS showed single band as indicator for enzyme purity. In conclusion, Okra pods could be one of natural source for proteases and this study recommended further studies regarding the adequate means for removal of the mucilage in order to increase the extraction efficiency.

هدفت هذه الدراسة إلى استخلاص وتنقية بروتييز قرنات البامياAbelmoschus esculentus المحلية إذ اجريت عملية الاستخلاص باستخدام عشرة محاليل مختلفة في الرقم الهيدروجيني والقوة الأيونية، إذ أعطى محلول دارئ الفوسفات برقم هيدروجيني 7 وتركيز 0.05 مولار بوجود 2% كلوريد الصوديوم اعلى فعالية بالمقارنة بالمحاليل الأخرى بلغت الفعالية 7.2 وحدة/مل في حين تراوحت الاخريات بين 0.8-5.9 وحدة/مل. تلى ذلك عملية تنقية الأنزيم على عدة مراحل شملت الترسيب بكبريتات الأمونيوم بنسبة تشبع بين 20-85% إذ أعطت فعالية نوعية وعدد مرات تنقية وحصيلة أنزيمية (21.52 وحدة/ملغم و1.24 مرة و82.83%) بالتتابع، ثم مرر الأنزيم على عمود DEAE-cellulose بأبعاد 1.1×22 سم والذي نتج عنها فعالية نوعية بلغت 88.50 وحدة/ملغم، فعالية كلية 566.40، في حين كانت عدد مرات التنقية والحصيلة الإنزيمية لها 5.1 و46.67% بالتتابع، واستكملت عملية التنقية باستخدام الترشيح الهلامي باستخدام هلام السيفادكس G-75بأبعاد 1.5×65 سم إذ أعطت فعالية نوعية وعدد مرات تنقية وحصيلة إنزيمية (98.82 وحدة/ملغم و5.7 مرة و40.17%) بالتتابع، في حين أجريت عملية التأكد من نقاوة الإنزيم باستخدام الترحيل الكهربائي لهلام الاكريل امايد 10% NATIVE-PAGE بغياب المواد الماسخة والتي أظهرت وجود حزمة بروتينية واحدة تابعة لبروتييز قرنات الباميا, وبالنتيجةً، يمكن لقرون الباميا ان تكون أحد المصادر الطبيعية للبروتييزات، وتوصي الدراسة الحالية بمزيد من البحوث بشأن الوسائل الملائمة لإزالة المادة الصمغية ومن ثم زيادة كفاءة الاستخلاص الأنزيمي. ER -