TY - JOUR ID - TI - Purification and Characterization of Phytase from Fruit Bodies of Local mushroom Pleorotus ostreatus Grown by Solid State Fermentation تنقية وتوصيف الفايتيز من الاجسام الثمرية للفطر Pleorotus ostreatus والمنمى تحت ظروف تخمر الاوساط الصلبة AU - Abdullah A. Hassan هوازن احمد عبد AU - HawazinA.Al-Jobory عبدالله عبد الكريم حسن PY - 2016 VL - 21 IS - 1 SP - 1 EP - 10 JO - Tikrit Journal of Pure Science مجلة تكريت للعلوم الصرفة SN - 18131662 24151726 AB - Phytase produced from an edible local mushroom P.ostreatus11L was purified in three steps, in precipitation with ammonium Sulfate (saturation ratio70%), the specific activity of phytase increased from 0.38u/mg protein in crude extract to 0.77 u/mg protein with purification of 2.03 fold and the enzyme yield was 92.05%, in ion exchange chromatography(DEAE-cellulose) step, specific activity was 3.6 u/mg protein with purification of 9.47 fold with a yield of 71. 82%. In the last step, with gel filtration chromatography using Sephadex G75 which gave the highest specific activity reached 7.5 U/mg with the purification folds arrived to 19.74 and enzyme yield was 42.61%. The results showed that there is only one band appeared in SDS-PAGE technique indicating a high purity of phytase enzyme , the purified phytase behaved as a monomeric protein with a molecular mass of about 25.12 kDa . The phytase was active over a broad range of incubation temperature (20 - 50ºC), maximal activity was 0.83 unit/ml when phytase incubated at 30ºC while the enzyme has thermal stability over a broad range of temperatures (20-60ºC) for one h since more than 50 % of the relative enzyme activity was retained after incubation. Phytase was active over a broad range of pH (4-8), maximal activity was 0.81unit/ml when phytase incubated at pH 6 followed by 0.79 unit/ml when phytase incubated at pH 5 without significant differences between them. In addition , the enzyme was full stable at pH 5 and 6 for 1 h of incubation at 37oC. phytase activity didn’t reach 70% at the other pH values. Hence it is inferred that the phytase was active over a broad range of pH 4-8. Among various metal ions, only MgSO4 has a syregenic effect with phytase activity in which activity increased as residual activity was 117.36% , while CuSO4 and ZnCl were the most inhibitory agents for P.ostreatus phytase.

اجريت تنقية الفايتيز من الفطر P.ostreatus (11L) بثلاث خطوات شملت الترسيب بملح كبريتات الامونيوم (نسبة الاشباع 70%) وفيها ارتفعت الفعالية النوعية من 0.38 وحدة/ملغم بروتين في المستخلص الخام الى 0.77 وحدة/ ملغم بروتين بعدد مرات التنقية 2.03 مرة وبحصيلة انزيمية 92.05% ، وعند خطوة كروماتوغرافيا التبادل الايوني باستخدام DEAE-cellulose بلغت الفعالية النوعية 3.6 وحدة/ملغم بروتين بعدد مرات التنقية 9.47 مرة وبحصيلة انزيمية 71.82% وفي اخر خطوة باستخدام كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي باستخدام الهلام Sephadex G 75 وصلت اعلى فعالية نوعية عند 7.5 وحدة/ ملغم بوتين بعدد مرات التنقية 19.74 مرة وبحصيلة انزيمية 42.61 %, اظهرت نتائج الترحيل الكهربائي باستخدام هلام الاكريلامايد المتعدد وجود حزمة بروتينية واحدة دليل على نقاوة الانزيم، بلغ الوزن الجزيئي للفايتيز المنقى 25.12 كيلودالتون، ابدى الفايتيز المنقى فعالية بمدى حراري 20-50م وبلغت اعلى فعالية انزيمية 0.83 وحدة/مل عند درجة حرارة 30م , بينما كان الانزيم ثابت عند مدى 20-60م لمدة ساعة واحدة اذ لم تنخفض الفعالية عن 50% ، كما كان الفايتيز المنقى فعالا عند مدى 4-8 من الرقم الهيدروجيني واعلى فعالية بلغت 0.81 وحدة/مل عند الرقم الهيدروجيني 6 تليها 0.79 وحدة/مل عند التحضين بالرقم الهيدروجيني5 مع عدم وجود فرق معنوي بينهما كما وكان الانزيم ثابت تماما عند قيم 5 و6 من الرقم الهيدروجيني عند التحضين مدة ساعة واحدة بدرجة حرارة 37م ولم تنخفض الفعالية عند اقل من 70% عند قيم الرقم الهيدروجيني الاخرى وعليه فيعد ثابت عندى المدى 4-8. بين مختلف المواد المعدنية سجلت كبريتات المغنيسيوم فقط تاثير تازري في زيادة فعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 117.36% بينما ادت كل من كبريتات النحاس وكلوريد الخارصين الى اعلى تثبيط في فعالية الانزيم. ER -