TY - JOUR ID - TI - Detection of Aflatoxigenic and Non-Aflatoxigenic Isolates of Aspergillus flavus Isolated From Some Clinical and Environmental Sources by HPLC and PCR Techniques الاعتماد على استشراب السائل عالي الأداء وتفاعل البلمرة المتسلسل في تحديد العزلات المنتجة للافلاتوكسين وغير المنتجة من Aspergillus flavus المعزولة من مصادر سريرية وبيئية AU - Mushtak T.S. Al-Ouqaili مشتاق طالب صالح AU - Mohammed H. Muslih محمد حمادة مصلح AU - Salah M. A. Al-Kubaisi صلاح محمود عاشور PY - 2018 VL - 12 IS - 1 SP - 40 EP - 48 JO - Journal of Biotechnology Research Center مجلة مركز بحوث التقنيات الاحيائية SN - 18151140 27081370 AB - This study aimed to determine the role of polymerase chain reaction (PCR) and High-performance liquid chromatography (HPLC) technique in the discrimination between aflatoxigenic and non-aflatoxigenic isolates of Aspergillus flavus. The isolates were identified based on macroscopical and microscopical characteristics, and extracted aflatoxin was detected by HPLC technique. Furthermore, DNA was extracted from the all isolates and carried out by PCR to amplify target genes encoding for toxin production (nor-1, ver-1 and aflR). The results showed that the genes (aflR, nor-1) were found in 11 (73%) of isolates, while the (ver-1) gene appeared in 10 (67%) of isolates. Both aflatoxigenic and non-aflatoxigenic isolates were also determined depending on the amplification of gene sites in the targeted DNA. HPLC technique has also used with high efficiency to ensure the aflatoxin-producing isolates and to evaluate the level of aflatoxin B1 production for 15 isolates of A. flavus. Ten isolates were able to produce aflatoxin with rates ranged from 0.78 to 45.03 ppm. PCR technique has proved high efficiency in the differentiation between aflatoxigenic and non-aflatoxigenic isolates of A. flavus. Moreover, aflatoxin production was directly associated with gene appearance and gene detection. Also, HPLC technique is a standard and superb technique in identifying and analyzing aflatoxin with high sensitivity and accuracy.

هدفت هذه الدراسة لتحديد دور تفاعل سلسلة البلمرة و تقنية الاستشراب السائلي عالي الأداء في التمييز بين العزلات المنتجة وغير المنتجة للافلاتوكسين من فطر .Aspergillus flavus شُخصت العزلات بالاعتماد على الخصائص المجهرية والمظهرية، و تم الكشف عن الأفلاتوكسين المستخلص بتقنية الاستشراب السائلي عالي الأداء. علاوةً على ذلك، تم استخلاص الحامض النووي لجميع العزلات و تم اجراء تفاعل البلمرة المتسلسل لتضخيم القطع المستهدفة (nor-1, ver-1 and aflR) التي تشفر لإنتاج الافلاتوكسين باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل أظهرت النتائج أن الجينات aflR و nor-1 ظهرت في 11 (73٪) من العزلات، في حين أن الجين ver-1 قد ظهر في 10 (67٪) من العزلات. كما تم تحديد كل من العزلات المنتجة وغير المنتجة للافلاتوكسين اعتمادا على تضخيم مواقع الجينات في الحمض النووي المستهدف. وقد استخدمت تقنية الاستشراب السائلي عالي الأداء بكفاءة للتحقق من العزلات المنتجة للأفلاتوكسين وتقييم مستوى إنتاج الافلاتوكسين B1 في 15 عزلة من الفطر A. flavus. عشر عزلات كانت لها القدرة على إنتاج الأفلاتوكسين بمعدلات تراوحت من 0.78 و 45.03 جزء من المليون. أثبتت تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل كفاءة عالية في التمييز بين العزلات المنتجة وغير المنتجة للافلاتوكسين للفطر .A. flavus فضلاً عن ذلك، يرتبط إنتاج الأفلاتوكسين ارتباطا مباشرا مع تواجد الجينات والكشف عنها. كما تعتبر تقنية الاستشراب السائلي عالي الأداء تقنية قياسية وممتازة في تشخيص و تحليل الأفلاتوكسين بحساسية و دقةٍ عاليةٍ. ER -