TY - JOUR ID - TI - ESTABLISHMENT OF REPRODUCIBLE LYMPHOBLASTOID CELL LINES استحداث طريقة منتجة لخطوط الزرع النسيجي للخلايا اللمفاويه AU - Nidal Abdul-Muhymen نضال عبد المهيمن AU - Layla Al-Omar ليلى شعيب العمر AU - Ismail I. Latif اسماعيل ابراهيم لطيف PY - 2005 VL - 4 IS - 1 SP - 3 EP - 9 JO - IRAQI JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES المجلة العراقية للعلوم الطبية SN - 16816579 22244719 AB - Background: A whole blood culture started with mononuclear cell fraction would contain several different cell types. Nevertheless, the T-lymphocytes can be cultured specifically and will out grow the others, eventually resulting in highly enriched population. Objective: The study was conducted as a trial of establishment of lymphocytes cell lines. This series of experiments were done for five selected subjects. The same protocols were applied to all individuals.Method: One ml of heparinized blood (HB) was cultured in tissue culture flask containing 9 ml stimulation medium. The flask was incubated at 37ºC in CO2 incubator for 3 days. Then every three days 1ml of whole blood culture from the flasks was subcultured into other tissue culture flask containing 9 ml stimulation medium, until visible suspension of mononuclear cells intervening agglutinated red blood cells were seen within two weeks of culture. Results: After the whole blood mononuclear cells cultures were maintained up to two weeks, the mononuclear cells were separated. Twenty four-hour incubation of these separated lymphocytes in stimulation medium, pure rich mononuclear cells were obtained and seen under inverted microscope. Conclusion: A new method for cultivation of lymphocytes from whole blood was developed for the first time and probably no other reported comparable method conducted elsewhere until know. Pure lymphocytes cultures were established, and maintained cell division. The potentiality of human peripheral lymphocytes themselves to act as precursor has been demonstrated in vitro by the cloning of established lymphoblastoid cell line. Different procedures for generation of T- cell lines were outlined. No feeder cells were needed in our protocol or the addition of IL2.Key words: lymphocyte culture, cell line, Phytohemagglutinin

خلفية الدراسة: ان استنبات الخلايا الوحيدة النواة من محتويات الدم الكامل يؤدي إلى احتواءه على الانواع المختلفة من الخلايا. مع ذلك فان الخلايا اللمفاوية نوع (T) يمكن ان تنمى نوعيا وتتفوق في نموها على الانواع الاخرى من الخلايا لمنتجة في النهاية وسط غني بها.هدف الدراسة: هدفت الدراسة لاجراء محاولة لابتكار طريقة جديدة لانشاء وعزل خط من الخلايا اللمفاوية من مكونات الدم الكامل. سلسلة التجارب هذه تم اجراءها لخمس اشخاص علما ان الطريقة المستخدمة هي نفسها اجريت على جميع الحالات.طريقة العمل: تم زرع 1 مل من الدم الكامل المضاف له مادة الهيبارين إلى قارورة الزرع النسيجي والتي تحتوي على 9 مل من الوسط الزرعي المحفز للخلايا. تم حضانته في حاضنة ثاني اوكسيد الكربون تحت درجة حرارة 37 درجة مئوية ولمدة ثلاثة ايام. اخذ 1 مل من هذا الزرع النسيجي وزرع ثانيتا في قارورة اخرى تحتوي على 9 مل من الوسط الزرعي المحفز , كررت هذه العملية كل ثلاثة ايام لحين تكون عالق من الخلايا الوحيدة النواة تتخلل كريات الدم المتجلطة وخلال اسبوعين.النتائج: تم الحصول على خلايا وحيدة النواة وبصورة نقية والتي تم ملاحضتها بواسطة المكرسكوب. وذلك بعد فترة اسبوعين من المحافظة عليها, وبعد فصلها عن مكونات الدم الاخرى بعد فترة حضانة 24 ساعة والتي تم فصلها بواسطة الوسط الزرعي المحفز للنمو.الاستنتاج: تم ابتكار طريقة جديدة لعزل وتكثير الخلايا اللمفاوية من محتويات الدم الكامل علما انه لم يتم التطرق إلى هذا الاكتشاف سابقا. وقد تم ملاحظة امكانية عمل الخلايا اللمفاوية نفسها كمادة بادئة في الزجاج وبواسطة استنسال هذه الخلايا, كذلك تم التطرق إلى مختلف الطرق لتكوين خطوط من الخلايا اللمفاوية نوع (T). في هذه الدراسة لم يتم استخدام خلايا مساندة او اضافة (IL2).مفتاح الكلمات : زرع الخلايا اللمفاوية، خط الخلايا،فايتوهيماكلوتنين. ER -