TY - JOUR ID - TI - Purification And Characterization of Trametes hirsute DSMZ No.5072 Laccase تنقية وتوصيف انزيم اللاكس(laccase) المنتج من الفطرTrametes hirsuta DSMZ no.5072 AU - Ali A. Taha Al Shaikly علي عبد الرحمن طه PY - 2009 VL - 3 IS - 1 SP - 46 EP - 59 JO - Journal of Biotechnology Research Center مجلة مركز بحوث التقنيات الاحيائية SN - 18151140 27081370 AB - In this study, the Production of laccase enzyme from Trametes hirsuta strain (DSMZ No.5072) in the 2L fermenter using different culturing media had been achieved. The production of laccase was also induced by using different concentrations of Copper sulphate, 2, 5 Xylidine and Gallic acid as inducers. The maximum laccase activitiy observed during T. hirsuta growth in the presence of various inducers was 5.89 U ml -1. Laccase purification was performed by precipitated the enzymes with ammoniam sulphate, saturation 90%, followed by gel filtration chromatography using Sephadex-G25 and more purified by ion-exchanger (DEAE-Sephadex). The obtained enzyme was concentrated by ultra filtration membrane and analyzed by SDS-PAGE. The activity of home prepared laccase and the commercial laccase from Trametes versicolor were carried out in different media (aqueous, reverse micelles, co-solvent, ionic liquid and ternary systems) depend on oxidation of ABTS as an enzyme substrate. The optimum pH for the laccase activity of the two fungal laccases was observed at acidic pH values close to (pH 3.5-4.6) while the optimum temperature was 70ºC.

في هذه الدراسة , تم انتاج انزيم اللاكس من العزلة Trametes hirsuta DSMZ no.5072 في مخمر سعة 2 لتر باستخدام وسطين زرعيين واضافة محفزات مثل كبريتات النحاس , حامض الكاليك ((Gallic acid والزايليدين (2,5 Xylidine) , حيث بلغت الفعالية القصوى للانزيم 5.89 وحدة /مل . اجريت عملية ترسيب الانزيم بنسبة تشبع 90% كبريتات الامونيوم ثم اجريت عملية التنقية باستخدام كروموتوكرافي الترشيح بالهلام ) (Sephadex-G25 والتبادل الايوني (DEAE-Sephadex) , ثم تركيز الانزيم باستخدام تقننية الترشيح الفائق (Ultrafiltration) والتحليل باستخدام تقنية الترحيل الكهربائي ) (SDS-PAGE . قورنت فعالية اكسدة المادة الاساس (ABTS) للانزيم المحضر مختبريا مع الانزيم القياسي من الفطر Trametes versicolor في الوسط المائي والاوساط العضوية قليلة المحتوى المائي , حيث لوحظ ان درجة الحموضة المثلى لكلا الانزيمين تقع ضمن المدى الحامضي (3.5-4.6) وان درجة حرارة التفاعل المثلى كانت 70م . ER -