TY - JOUR ID - TI - تثبيط فعالية انزيم بولي امين اوكسيديز المنقى جزئيا من مصل الاشخاص المصابين بداء السكر غير المعتمد على الانسولين AU - عمر يونس محمد العباسي PY - 2010 VL - 15 IS - 3 SP - 247 EP - 255 JO - Tikrit Journal of Pure Science مجلة تكريت للعلوم الصرفة SN - 18131662 24151726 AB - The research included the detection of polyamine oxidase [E.C.1.4.3.6] activity in serum of non-insulin-dependent diabetes patients (Type II). Optimal conditions for crude PAO activity were determined in serum using spermine as substrate. PAO activity was found to be proportional with time of reaction up to (60) sec. The maximum activity was obtained by using phosphate buffer at pH = 5, temperature (30) C, incubation time (5) min. and (100) l of enzyme volume.By using Linweaver-Burk plot, it was found that Vmax to be (0.44) enzyme unit/ml and Km value to be (2) mM with spermine as substrate. K+ was the most potent activator for PAO activity. It activated the enzyme by (200%). PAO was purified from serum by dialysis and anion exchange chromatography techniques. Two PAO isoenzymes I and II were obtained, with specific activity of (0.39) and (0.46) respectively, and with purification fold of (169.5) and (20) respectively compared to crude enzyme. Inhibition of partially purified PAO was studied by Vitamin E, Metformine drug and Metformine with Vitamin E. The higher inhibitory effects obtained at the lower concentrations of inhibitors 10-5, 10-4 and 10-5 M respectively.The inhibition type of PAO by using these concentrations was competitive. Km value without inhibitors was (1.33) mM, then became Km` (2.5, 5 and 6.6) mM with inhibitors respectively. However Vmax value remained (0.27) enzyme unit/ml. The inhibition properties shown, the inhibition constant Ki values were (0.53, 0.29 and 0.20) mM for each inhibitor respectively. Accordingly, these results indicate that inhibitory effect of Melformine with Vitamin E was a better than Metformine and this was a best of Vitamin E.Key words:

تم دراسة وجود فعالية انزيم بولي امين اوكسيديز (PAO) في مصل الاشخاص المصابين بداء السكر غير المعتمد على الانسولين (النوع الثاني). وحددت الظروف المثلى لقياس فعالية الانزيم الخام باستخدام السبرمين كمادة اساس. وجد ان فعالية انزيم PAO تتناسب مع تقدم زمن التفاعل ولحد (60) ثانية، وان اقصى فعالية للانزيم كانت عند استخدام محلول الفوسفات المنظم عند pH=5 ودرجة حرارة (30) م وفترة حضن (5) دقائق وحجم انزيم (100) مايكروليتر. من خلال رسم لينويفر-بيرك، وجد ان السرعة القصوى التي يعمل بها الانزيم تساوي (0.44) وحدة انزيمية/مللتر، وان قيمة Km تساوي (2) ملي مولار باستخدام السبرمين كمادة اساس. ان ايون K+ هو اكثر الايونات تحفيزا لفعالية انزيم PAO ، حيث ادى الى تحفيز الانزيم بمقدار (200%). تم تنقية انزيم PAO من المصل باستخدام تقنيات الفرز الغشائي وكروماتوغرافيا التبادل الايوني السالب، وتم الحصول على المتماثلين I وII للانزيم وبفعالية نوعية مقدارها (0.39) و (0.46) وحدة انزيمية/ملغم بروتين على التوالي، وبنقاوة بلغت (169.5) و (20) مرة على التوالي.درس تثبيط فعالية انزيم PAO المنقى جزئيا بوجود فيتامين E وعقار المتيفورمين وفيتامين E مع عقار المتيفورمين، ولوحظ ان ادنى تراكيز لهذه العقارات ادت الى اعلى تاثير تثبيطي كانت 10-5، 10-4 و 10-5 مولار على التوالي. وان نوع التثبيط الحاصل للانزيم باستخدام هذه التراكيز كان تثبيطا تنافسيا. اذ كانت قيمة Km بعدم وجود المثبط 1.33 ملي مولار، بينما اصبحت قيم Km` 2.5، 5 و 6.6 ملي مولار بوجود المثبطات المذكورة اعلاه على التوالي. في حين بقيت قيمة Vmax¬ ثابتة لم تتغير وقيمتها (0.27) وحدة انزيمية/مللتر. ومن دراسة خصائص التثبيط، تبين ان قيم ثابت التثبيط Ki كانت 0.53، 0.29 و 0.20 ملي مولار لكل من المثبطات المستخدمة على التوالي. ووفقا لهذا فان هذه النتائج تشير الى ان الميتفورمين مع فيتامين E ذو تاثير تثبيطي افضل من المتيفورمين وهذا الاخير بدوره افضل من فيتامين E . ER -