TY - JOUR ID - TI - DETERMINATION OF PLASMIDS ROLE IN BACTERIOCIN PRODUCTION FROM PATHOGENICKLEBSIELLA تحدید دور البلازمیدات في إنتاج البكتریوسین من الكلبسیلا المرضیة AU - محمد مهدي الزبیدي نوریه عبد الحسین علي PY - 2011 VL - 10 IS - 2 SP - 227 EP - 241 JO - Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية SN - 18154794 25207245 AB - One hundred and twenty five sample were collected as(50 Burne+wound and75blood samples)from hospital patients (Ibn Albalady and Alkindy Hospital inBaghdad at period Nov .2010. to March. 2011). 40 bacterial isolates wereisolated of which 18 isolates showed similar characteristic to Klebsiella dependingon phenotypic characterization and biochemical test and using with AP1 20Esystem and VITEK 2. Agar disc were used to screen the isolates for their ability ofbacteriocin production. The result showed that7isolates had the ability ofbacteriocin production specially Klebsiella terrigena that show the highestproduction. Plasmid content was studied for Klebsiella isolates .Results showedthat some isolates has plasmid and genomic DNA. To determine the role ofplasmid in bacteriocin production, two highest isolates were selected (Klebsiellaterrigena 7 and Klebsiella terrigena 6 )to perform plasmid curing experiment usingEthidium bromide. Result showed that the plasmid has been cured at512 mg /ml Ethidium bromide. the cured cells lost their ability of bacteriocinproduction which proved the bacteriocin gene is located on plasmid. To confirmthis result, transformation experiment was performed by transferring the plasmidthe extracted from Klebsiella terrigena 7 to the standard strain E.coli MM 294rif +which is free of plasmid and have no resistance to Ampicillin (Amp), the resultshowed that, the E.coli MM 294rif + strain become Amp resistant in addition ithad the ability to produce the bacteriocin.

الخلاصةجمعت 125 عینة( 50 عینة حروق وجروح و 75 عینة دم) من المرضى ال ا رقدین والمراجعین لمستشفیات (إبن2011 .عزلت 40 عزلة بكتیریة منها 18 عزلة أعطت /03/ 2010 إلى 1 /11/ البلدي والكندي) في بغداد وللفترة 1AP صفات مشابهة لبكتریا الكلبسیلا إعتماداً على الصفات المظهریة والتشخیص الكیموحیوي وإستعمال نظام 1تم غربلت جمیع العزلات المشخصة في قابلیتها على إنتاج البكتریوسین .VITEK مع إستعمال نظام 2 E20بإتباع طریقة أقراص الاكار. حیث كانت نتائج إستعمال طریقة أق ا رص الاكار 7عزلات من مجموع 18 عزلة ذاتقابلیة في إنتاج البكتریوسین. درس المحتوى البلازمیدي لجمیع عزلات بكتریا الكلبسیلا المنتجة للبكتریوسینوالبالغ عددها 7عزلات. أظهرت النتائج إحتواء بعض العزلات على حزمة كروموسومیة وأخرى بلازمیدیة إماالبعض الأخر فقد إحتوى على حزمة كروموسومیة فقط. ولغرض تحدید دور البلازمیدات في إنتاجو Klebsiella terrigena البكتریوسین فقد أنتخبت عزلتین لإجراء عملیة تحیید البلازمیدات وهما 6الأكثر إنتاجا للبكتریوسین وبإستعمال صبغة برومید الاثیدیوم. أظهرت النتائج أن Klebsiella terrigena 7صبغة برومید الاثیدویوم بتركیز 512 مایكروغ ا رم/ملیلتر قد ساعدت على إ ا زلة البلازمید من العزلتینالمنتخبتین إضافة إلى فقدان قابلیتهما على إنتاج البكتریوسین، مما یدل على إن ألجین المسؤول عن إنتاجالبكتریوسین هو بلازمیدي الموقع ولتأكید هذه النتیجة فقد أجریت عملیة التحول الوراثي وذلك بنقل البلازمیدالخالیة من E.coli MM 294rif + إلى عزلة Klebsiella terrigena المستخلص من العزلة 7أصبحت مقاومة للامبسلین بعد أن كانت E.coli MM 294rif + البلازمیدات. أظهرت النتائج إن العزلةحساسة له إضافة إلى أنها أصبحت منتجة للبكتریوسین. مما یؤكد أن البلازمید یحمل الجین المسؤول عنإنتاج البكتریوسین. ER -