TY - JOUR ID - TI - Preparation of antibodies type IgY against Salmonella typhi lipopolysaccharide in chicken eggs تحضير أضداد نوع IgY ضد متعدد السكريد الشحمي لبكتريا Salmonella typhi في بيض الدجاج AU - Mouruj A. Alaubydi مروج عبد الستار العبيدي AU - Susan Ahmad سوزان احمد AU - Muayad Sabri مؤيد صبري PY - 2012 VL - 6 IS - 2 SP - 15 EP - 22 JO - Journal of Biotechnology Research Center مجلة مركز بحوث التقنيات الاحيائية SN - 18151140 27081370 AB - ipopolysaccharide was extracted from local isolate Sallmonella typhi (previously isolated and characterized) by hot EDTA method, and the extract was partially purified by gel filtration chromatography on sepharose Cl-6B gel. The results showed that the percentage of the carbohydrates amount in the partially purified LPS extract was 43.7%, while the percentage of binding proteins in the same extract was 0.7% with no nucleic acids was found. The molecular weight for the LPS was measured by the gel filtration chromatography method using Sepharose Cl-6B gel and was equivalent to 263000 Dalton. The LD¬50 of LPS was determined by injection of chicken embryos type Ice Brown in the charioallantoic membrane, and was 14.66 µg/Kg. In order to obtain anti S. typhi IgY antibodies, chickens were immunized with the partially purified S. typhi subcutaneously. The IgY antibodies were extracted from eggs yolk by water dilution method and the extract was partially purified by ammonium sulphate precipitation at ratio 60% saturation, and gel filtration chromatography on sepharose Cl-6B gel. The results showed that the protein amount was equivalent to 23.5 mg/ml; specific activity was 0.268, and an overall yield of 70%. The molecular weight for the IgY antibodies was measured by the gel filtration chromatography method using Sepharose Cl-6B gel and was found to be 178000 dalton. The concentration of anti S.typhi LPS IgY antibodies in chicken eggs were investigated by ELISA and was found to be 6.3 mg/ml, and there is a significant differences (P<0.01).

استخلص متعدد السكريد الشحمي (LPS) من بكتريا Sal. typhi التي سبق ان تم عزلها وتوصيفها ، بطريقة الـ EDTA الساخن ، ونقي المستخلص جزئيا بطريقة كروموتوغرافيا الترشيح الهلامي باستعمال هلام الـ Sepharose Cl-6B . بينت النتائج ان كمية الكاربوهيدرات في المستخلص كانت 43.7 % ونسبة البروتين المرتبط 0.7% وانه خالي من الاحماض النووية . قدر الوزن الجزيئي للـLPS بوساطة كروموتوغرافيا الترشيح الهلامي كان مساويا الى 263000 دالتون ، وتم تحديد الجرعة المميتة النصفية LD50 لعديد السكريد الشحمي المنقى جزئيا عن طريق حقن اجنة الدجاج نوع Ice Brown في غشاء الالنتويس وكانت مساوية الى 14.66µg / كغم . ولغرض الحصول على اضداد نوع IgY متخصصة لعديد السكريد الشحمي ، تم تمنيع الدجاج تحت الجلد ، بعد ذلك استخلصت الاضداد من صفار البيض بطريقة التخفيف المائي ، ونقي المستخلص جزئيا بخطوتين الاملى بوساطة الترسيب باستعمال كبريتات الامونيوم بنسبة تشبع 60% ، والثانية بوساطة الترشيح الهلامي ، اظهرت النتائج ان كمية البروتينات في مستخلص اضداد IgY المنقى جزئيا كانت مساوية الى 23.5 ملغم/مل مع فعالية نوعية 0.268 ملغم IgY/ ملغم بروتين وحصيلة 70% ، وقدر الوزن الجزيئي للأضداد بالترشيح الهلامي باستعمال هلام Sepharose Cl-6B وكان مساويا الى 178000 دالتون . تم التحري عن تركيز اضداد IgY في بيض الدجاج بوساطة اختبار الـ ELISA ، وكان مساويا الى 6.3 ملغم / مل ، وظهر ان هناك فروقات معنوية على مستوى احتمالية 0.01 . ER -