TY - JOUR ID - TI - Production and Characterization of partial purified Protease from the fungal species Trichoderma harzianum إنتاج وتوصيف إنزيم البروتييز من الفطر Trichoderma harzianum وتنقيته جزئيا AU - محمد عبد الله جبر AU - زينه هادي عبيد AU - أمير مزهر PY - 2012 VL - 10 IS - 4 SP - 121 EP - 132 JO - journal of kerbala university مجلة جامعة كربلاء SN - 18130410 AB - Laboratory experiment was achieved for production and partial purification of protease from the fungal species Trichoderma harzianum. After screening of enzyme productivity by calculating the radial of hemolysis zone in Skimed milk was 7 cm. The optimal conditions for protease production were studied using liquid state fermentation composed of wheat bran as protein source. The results revealed the optimal conditions of enzyme production after five days of incubation at 25 C in liquid mineral medium with 2% concentration of wheat bran and pH 4.0. The protease was purified by several steps, including precipitation with 80 % saturation of ammonium sulphate as the first step of purification, the obtained purification fold was 3.47 and recovery 43%. Second step of partial purification which was ion exchange chromatography using DEAE- Cellulose in the presence of Tris buffer ( 0.05 Molar and pH 9 ). The obtained purification fold 25 and recovery 25% for A image which have specific activity 225 unit/ mg protein. The B image step obtained specific activity 375 unit/ mg protein , purification fold 41.6 and recovery 20.8 %. The optimum pH of activity for partially purified enzyme with ion exchange chromatography for both A and B image was 9 and 5 respectively and the optimum temperature was 35 C for both steps.

أجريت دراسة مختبرية لإنتاج وتنقية إنزيم البروتييز بصورة جزئية من الفطر Trichoderma harzianum المعزول من تربة محلية في محافظة بابل فبعد الكشف عن إنتاج الفطر لهذا الإنزيم وذلك من خلال قياس قطر منطقة التحلل في وسط ال Skim milk والتي بلغت 7 سم ، تم دراسة الظروف المثلى للإنتاج في وسط تخمر معدني سائل حاوي على نخالة الحنطة كمصدر للبروتين ، بينت النتائج إن الظروف المثلى للإنتاج هي عند الحضن لمدة خمسة أيام في درجة حرارة 25 مْ في وسط معدني سائل حاوي على نخالة الحنطة بتركيز 2 % وبرقم هيدروجيني 4 . نقي الإنزيم بعدة خطوات شملت الترسيب بكبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع 80 % كخطوة أولى للتنقية وتم الحصول على عدد مرات تنقية 3.47 وبحصيلة إنزيمية 43 %. أعقبت خطوة الترسيب بكبريتات الأمونيوم خطوة التبادل الأيوني باستعمال المبادل الأيوني ( DEAE- Cellulose ) بوجود محلول دارئ ترس( 0.05 مولر وبرقم هيدروجيني 9 ). وقد أعطت هذه الطريقة عدد مرات تنقية 25 وبحصيلة إنزيمية 25 % لصورة الإنزيم A وبلغت الفعالية النوعية فيها 225 وحدة / ملغم بروتين أما بالنسبة لصورة الإنزيم B فقد بلغت الفعالية النوعية فيها 375 وحدة / ملغم بروتين بعدد مرات تنقية 41.6 وبحصيلة إنزيمية 20.8 %. إن الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية إنزيم البروتييز المنقى جزئيا باستعمال المبادل الأيوني لصورتي الإنزيم A و B هما 9 و 5 على التوالي في حين إن درجة الحرارة المثلى لفعالية الإنزيم المنقى جزئيا هي 35 مْ. ER -