TY - JOUR ID - TI - IDENTIFICATION OF PSEUDOMONAS AERUGINOSA FROM BURN WOUNDS ISOLATES BY PCR USING EXOTOXIN A-SPECIFIC PRIMERS. تشخيص بكتيريا Pseudomonas aeruginosaالمعزولة من جروح الحروق بواسطة تفاعل البوليمريز المتسلسل بإستعمال بادئات خاصة بالذيفان الخارجي أ. AU - Iman A. Hussien PY - 2012 VL - 11 IS - 2 SP - 282 EP - 291 JO - Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية SN - 18154794 25207245 AB - The purpose of this research was to evaluate the use of PCR for the identification of burn wounds isolates of Pseudomonas aeruginosa by amplifying a 396-bp region of the exotoxin A (ETA) structural gene sequence. Specific primers amplified ETA-positive P. aeruginosa DNA, whereas other species of Pseudomonas and bacteria other than Pseudomonas which were isolated from burn wounds infections did not yield any 396-bp fragment. The specificity and sensitivity of the assay were 100 and 96%, respectively, which confirms the assay's reliability for diagnostic and epidemiological studies. The assay can detect 0.2 pg of P. aeruginosa DNA per reaction mixture (3ul) by ethidium bromide staining of an agarose gel. This method is rapid and less cumbersome than other diagnostic methods for the identification of P. aeruginosa strains. The method described can be used to detect a low level of P. aeruginosa from clinical samples without the use of selective media or additional biochemical tests.

الغرض من هذا البحث هو لتقييم مدى إمكانية إستعمال تفاعل البوليمريز المتسلسل Polymrase chain reaction ((PCR في تشخيص بكتريا Pseudomonas aeruginosaالمعزولة من جروح الحروق الملوثة, إذ تم التشخيص بمضاعفة396-bp في تتابع القواعد النيتروجينية للمورثة التركيبية للذيفان الخارجي أ (exotoxin A) بإستعمال بادئات خاصة بتلك المورثة. أظهرت النتائج إن بكتيرياP. aeruginosa الحاوية على مورثة الذيفان الخارجي(أ) أعطت نتيجة موجبة في الفحص أما بكتيريا Pseudomonas التابعة لنوع آخر غير aeruginosaالغير حاوية على مورثة الذيفان الخارجي (أ) أعطت نتيجة سالبة لهذا الفحص وأيضاً تم إختبار خصوصية وحساسية هذا الإختبار وكانت النتائج 100و%96على التوالي وهذه النتائج تعزز إمكانية إستعمال هذا الإختبار في الدراسة التشخيصية والوبائية لهذه البكتيريا وبينت النتائج إنه يمكن الكشف عن pg 0.2 من الحمض النووي الديوكسي رايبوزي (DNA) لكل3 مايكروليتر من خليط التفاعل إذ ظهرت النتائج الموجبة بشكل حزمة (DNA) بحجم 396-bp في هلام الاكاروز المُرحل كهربائياً والمصبوغ بصبغة بروميد الاثيديوم. وأثبتت الدراسة إن هذه الطريقة أسرع وأدق من الطرق التقليدية المتبعة لتشخيص هده البكتيريا إذ يمكن الكشف من خلالها عن كميات ضئيلة من البكتيريا في العينات المرضية دون الحاجة إلى أوساط مزرعية إنتقائية أو إختبارات كيمو حيوية إضافية. ER -