TY - JOUR ID - TI - Pathological and molecular study of mycotic abortion in ewes دراسة مرضية وجزيئية لمسببات الاجهاض الفطرية في الاغنام AU - Bushra Hamza Faris بشرى حمزة فارس AU - Mohammed J. Alwan محمد جويد علوان AU - Ban Abbass Abdulmajeed بان عباس عبد المجيد PY - 2013 VL - 4 IS - 1 SP - 41 EP - 56 JO - Kufa Journal For Veterinary Medical Sciences مجلة الكوفة للعلوم الطبية البيطرية SN - 20779798 29598478 AB - Abstract: The aims of the present study is to isolate the fungal species associated with ewe abortion and to examine the histopathological changes in the placenta associated with fungal isolates .In addition to study the genetic information of TNF alpha gene, intensity and score of TNF-alpha protein in aborted and normal placenta by PCR and IHC respectivly. Frozen placental tissue and paraffin embedded tissue belong to aborted and normal groups were used for assessment of TNF alpha gene by studying the genetic information of TNF-alpha gene in aborted and normal placental sample by PCR .immmunohistochemical study was carried out to determine TNF protein in the placental sample. The same frozen placenta tissue samples were also used for DNA extraction to detect TNF alpha gene in the two groups. A fragment of (238 bp ) of the TNF alpha gene was amplified by PCR using primers ,the sequence of sense and antisense primer for TNF alpha gene was: GAA TAC CTG GAC TAT GCC GA,CC TCA CTT CCC TAC ATC CCT (bp 238) Gene Bank: X56756. The study showed that 10 fungal species were isolated from aborted placenta with high percentage of these isolates was recorded in March ,.The fungal isolates were variable according to region of sample collecting ,high percentage in the AL-Manathera(36%),followed by Al-Kuzweenia (34%) and Al-Shabaka(30%).The fungal isolates include Coccidioides immitis (16%). Asperigllus.fumigitus (14%), Trichophyton, Rhodetella rubra, and Aspergillus.ochraus ,(10%) for each one . Candida kruzei,(8%). Aspergillus.flavus and Geotrichum ,6%) for each one . Prototheca..zopfi, Saccharomyces.cerevisia, Blast.capitatuss, Cryptococcus uniguttultus and Candida zeylanoides,(4%) for each one . This study revealed the presence of ~238bp band in addition to the ~300 ,400 and 600 bp desired fragment in PCR products that related to aborted samples compared to normal one .,this may be due to polymorphism within the TNF gene itself. We found a significant elevated TNF alpha protein in inflammatory cell (macrophage) of aborted sheep placenta (increasing of intensity and score), while no changes could be observed for pro-inflammatory molecules in the control sample (normal delivery) The current study expressed correlation between polymorphisms in TNF- alpha gene ,immunohistochimistry and the fungal isolated species. The histopathological examination showed acute suppurative placentitis, necrosis of chorion villi, congestion of blood vessels with fibrin deposition in the villus stroma and inter villus space, in addition to calcification in the villus stroma and sloughing and desquamation of cytotrophoblast .numerous yeast and spheriols were detected in the placental tissue by periodic acid Schiff reaction(PAS).

الخلاصة: تناولت هذه الدراسة عزل الفطريات المصاحبة لحالات الاجهاض في الاغنام في محافظة النجف وكذلك دراسة التغيرات المرضية في مشيمة هذه الحيوانات كما تم استعمال طريقة IHCو PCR في هذه الدراسة لتحديد كمية ومكان انتاج المحركات الخلوية الالتهابية(TNF alpha) في مشيمات الاغنام المجهضة ومشيمات الاغنام الوالدة طبيعيا. تم استعمال النسيج المجمد الماخوذ من مشيمة الحيوانات المجهضة والوالدة طبيعيا لدراسة(TNF alpha ) عن طريق معرفة المعلومات الجينية ل(TNF alpha) وذلك باستعمال تقنية (PCR) عن طريق استعمال بادات خاصة ل(TNF alpha) ذي الوزن الجزيئي (238bp) وحسب تردد القواعد الامينية التالية: GAA TAC CTG GAC TAT GCC GA, CC TCA CTT CCC TAC ATC CCT كذلك تم استعمال النماذج المذكورة انفا في استخلاص الحامض النووي (DNA) لتقويم (TNF alpha) في مشيمة الحيوانات المذكورة انفا. تم عزل 10 انواع فطرية من 50 مشيمة اغنام مجهضة (Coccidioides spp) بعدد 8من مجموع 50 وبنسبة (16%) و(Aspergillus fumigates) بعدد 7 من مجموع 50 وبنسبة (14%) و(Aspergillus ochraus, Trichophyton spp and Rhodotella rubra) بعدد5 من مجموع 50 وبنسبة (10%) و(Candida krusei)بعدد 4 من مجموع 50 وبنسبة (8%) و(Aspergillus flavus and Geotrichm) بعدد 3 من مجموع 50 وبنسبة (6%) و(Cryptococcus uniguttulutus , Saccharomyces.cerevisia Prototheca..zopfi Candida zeylanoides, and Blast.capitatus) بعدد 2 من مجمو ع 50 وبنسبة (4%) .ومن خلال هذه النتائج تبين ان فطر (Coccidioides spp) هو من اخطر الفطريات المعزولة في هذه الدراسة وتم تسجيله لاول مرة في العراق. من خلال نتائج (PCR) ل(TNF alpha) , اظهرت هذه الدراسة وجود حزم اضافية ذات وزن جزيئي 300-400-600 فضلا عن الحزمة الاعتيادية ل(TNF alpha) ذي الوزن الجزيئي (238) . وقد لوحضت هذه التغيرات في مشيمة الحيوانات المجهضة مقارنة بالنماذج العائدة الى الحبوانات الوالدة طبيعيا ومن الممكن ان يكون هذا سببه حدوث تغيرات او تحويرات (polymorphism in TNF alpha) .اما من خلال نتائج (IHC) لبروتين (TNF) فقد تم ملاحضة زيادة ملحوضة في بروتين (TNF) في الخلايا الالتهابية (البلعمية) العائدة الى مشيمة الحيوانات المجهضة ,في حين لاتوجد هنالك اي تغيرات ممكن ملاحضتها لهذا البروتين في مشيمة الاغنام الوالدة طبيعيا .وقد تم ملاحظة وجود علاقة مترابطة بين نتائج (PCR) و(IHC) ففي حالت وجود التغيرات (polymorphism) ,تكون هنالك زيادة ملحوظة في البروتين المنتج . تبين وجود ارتباط بين ضراوة الفطر المسبب للاجهاض وبين التغيرات الخاصة ل(TNF alpha). اما بالنسبة الى التغيرات المرضية في مشيمة الاغنام المجهضة فقد شملت وجود التهاب قيحي مشيمي متموت فضلا عن احتقان الاوعية الدموية وترسب الكالسيوم في انسجة المشيمة , كذلك وجود انسلاخ لخلايا (syncytotrophoblast) في انسجة مشيمة الحيوانات الجهضة .اما التغيرات المرضية في اجنة الحيوانات المجهضة فقد تم ملاحضة التهاب رئوي قيحي, والتهاب كبدي تموتي والتهاب الطحال الليفي التموتي كذلك فمن اهم التغيرات المرضية التي تمت ملاحظتها هي وجود(Spheriole) في المشيمة واجنة الحيوانات المجهضة المصابة بفطر (Coccidioides spp). ER -