@Article{, title={Cloning and Expression of Xylitol Dehydrogenase Enzyme from Spathaspora passalidarum in Saccharomyces cerevisiae}, author={Yaseen I. Mamoori and Majed H. Al-Jelawi and Abdul Ghani I. Yahya}, journal={Al-Nahrain Journal of Science مجلة النهرين للعلوم}, volume={17}, number={1}, pages={123-131}, year={2014}, abstract={Spathaspora passalidarum is a natural xylose fermenting yeast that have the fungal pathway for converting xylose to ethanol. The second enzyme in this pathway is NAD+- dependent Xylitol dehydrogenase which converts xylitol to xylulose. In this study, the sequence of the nucleotides for XYL2 gene is found in JGI site. It consists of 1098 bp and code for 365 amino acids. The forward and reverse primers were designed with restriction sites on the 5` termini which are SacII and NotI restriction enzyme respectively using Lasergene 9.0 program. Genomic DNA was isolated and purified from S .passalidarum and amplified using PCR and it cloned into pSN303 resulting of the pYIM2 plasmid. Then it is transformed into Escherichia coli. This plasmid was isolated from E. coli and retransformed into S. cerevisiae and transformant is called YJTY2. Results showed that enzyme specific activities with NAD+ as cofactors were 2.32 and 0.0 U/mg for S. cerevisiae YJTY2 and S. cerevisiae (CENPK2.1D) respectively. The enzyme did not show any activity with NADP+ as a cofactor. This enzyme is NAD+ dependent and can be used in combination with xylose reductase in S. cerevisiae to be able to ferment xylose.

S. passalidarum هي خميرة تخمر الزايلوز طبيعيا ولها مسار الفطريات في تحويل الزايلوز الى ايثانول. الانزيم الثاني في هذا المسار هو NAD+ - dependent xylitol dehydrogenase الذي يحول الزايلتوز الى زايللوز والذي يمكن استغلاله بواسطة مسار Pentose phosphate pathway ليعطي الناتج النهائي وهو الايثانول. في هذه الدراسة، التعاقب النيوكليوتيدي لهذا الجين XYL2 وجد في موقع JGI وهو مكون 1098 زوج قاعدي ويشفر لـ 365 حامض اميني. صمم البادئ الامامي والعكسي مع مواقع القطع في النهايات من الطرف 5 للانزيمين SacII, NotI على التوالي بواسطة البرنامج Lasergen 9.0. عزل الدنا الجينومي من S. passalidarum. ضخم الجين بواسطة الPCR و كلون في البلازميد pSN303 لينتج البلازميد pYIM2. ثم حول في Escherichia coli. عزل هذا البلازميد وحول مرة اخرى الىS. cerevisiae سميت هذه المتحولة بـ YJTY2. اظهرت النتائج بان الفعالية الانزيمية الخاصة مع NAD+ كعامل مساعد كانت 2,23 و0,0 وحدة/ملغم لـ S. cerevisiae YJTY2 وS. cerevisiae CEN.PK-1D على التوالي. لم يظهر الانزيم اي فعالية مع NADP+ كعامل مساعد. من هذه النتائج نستخلص بان هذا الانزيم معتمد على NAD+ ويمكن استخدامه معxylose reductase في cerevisiae .S لكي تستطيع ان تخمر الزايلوز.} }