TY - JOUR ID - TI - Molecular epidemiology analysis of Salmonella enterica serotype Typhi used Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) التحليل الوبائي الجزيئي لبكتريا Salmonella enterica serotype Typhi بأستخدام جهاز الترحيل الكهربائي ذا الحقل النبضي AU - Ashna J. Faik اشنا جمال فائق AU - Farook. K. Hassan فاروق خالد حسن AU - Ali Al-Zaag علي عبدالرحمن الزعاك PY - 2014 VL - 8 IS - 2 SP - 49 EP - 59 JO - Journal of Biotechnology Research Center مجلة مركز بحوث التقنيات الاحيائية SN - 18151140 27081370 AB - Strain typing is an integral part of molecular epidemiology used to discern the clonality of Salmonella Typhi involved in local epidemics. The purpose of this study is to identify sporadic Salmonella enterica serotype Typhi by conventional and molecular methods that include characterization by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) and to present molecular epidemiology analysis. Thirty isolstes of Salmonella typhi from sporadic clinical cases of typhoid fever were obtained. They represent cases from Baghdad, Basra, Babylon and Diala provinces during the period between June 2005 to July 2006. Two biotypes were obtained, 26 isolates under biotype I and four under biotype II. Two antibiogram patterns were obtained: twenty-nine isolates were susceptible to all antibiotic used while the remaining isolate was of different pattern. Plasmid profiling allowed little or no differentiation amongst these isolates. Only 4 (13.3%) isolates were found to contain plasmids which were of three patterns, the majority of strains 26 (86.7%) isolates did not show any plasmid. BOX-PCR fingerprinting has revealed 9 distinct patterns.Cluster analysis by UPGMA based dendrogram revealed six clusters with 90% similarity. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of digested chromosomal DNAs from these Salmonella Typhi isolates was performed using the restriction endonucleases XbaI (5'-TCTAGA-3') and SpeI (5'-ACTAGT-3'). XbaI-based analysis was superior to SpeI restriction patterns. PFGE fingerprinting with XbaI restriction have yielded sixteen distinct patterns. Cluster analysis by UPGMA based dendrogram revealed seven clusters with 90% similarity. PFGE fingerprinting with the comparative use of the XbaI and SpeI endonucleases have proved high discriminatory value to other molecular methods and a helpful tool for the epidemiological typing of Salmonella Typhi isolates.

تم الحصول على ثلاثين عزلة لبكتريا Salmonella enterica serotype Typhi من محافظات مختلفة من العراق شملت بغداد ، بابل ، البصرة، ديالى من عينات دم لمرضى يعانون من حمى التايفوئيد , شخصت العزلات في مختبرات الصحةالعامة المركزي خلال الفترة الزمنية المحصورة بين حزيران2005 و تموز2006 . التنميط المظهري شمل على التنميط الحيوي Biotype باستخدام عدة التشخيص API 20E حيث تبين وجود نمطين من انماط الحياتية تضمن الاول26 عزلة بنسبة % 86.7 بينما الثاني تضمن 4 عزلات بنسبة %13.3. التنميط الاخر و المعتمد على حساسية العزلات للمضادات الحياتية، اظهر أن 29 عزلة كانت حساسة لجميع مضادات الحياة المستعملة و هيamikacin, ampicillin, ceftriaxone, ciprofloxacin, gentamicin) chloramphenicol, tetracycline, trimethoprim-sulfamethoxazole, nalidixic acid ) بينما أظهرت أن عزلة واحدة مفاومة ل nalidixic acid مما يتبين وجود نمطين من انماط التثبيط الحياتي و كان النمط الاول بنسبة%96.7. التنميط الجيني شمل على المحتوى البلازميديplasmid profile لقد تبين ان هذه الطريقة لم تظهر اختلافات بين العزلات و التي يمكن اعتمادها لغرض المقارنة ولتحديد الانماط والكشف عن مدى التشابه وبائيا بينها، و قد لوحظ وجود 4عزلات فقط تمتلك لبلازميدات و بثلاث أنماط مختلفة بينما 26 عزلة عدم امتلاكها للبلازميدات.استعملت تقنية BOX-PCR للكشف عن مدى تكرار مناطق بين الجينات ومدى اختلافها بين العزلات و قد لوحظ تكرار حزم من DNAتراوح عددها من 11-2 حزمة و بحجم جزيئي يتراوح ما بين 1500-200 زوج فاعدي و حيث تم الحصول على 9 انماط مختلفة و بينت نتائج التحليل الاحصائي ان معامل التشابه Dice Coefficient كان 1-0.33 . تم تحليل البيانات اعتماداً على UPGM حيث اظهرت نتائج التحليل التجميعي , بأن نسبة التشابة %90 لستة مجاميع و وجود علاقة بين هذه المجاميع وقد تمت مناقشتها من الناحية الوبائية. اعطى التحليل الكروموسومي بواسطة جهاز الترحيل الكهربائي ذا الحقل النابض ( Electrophoresis (Pulsed Field Gel توزيعا مناسبا للقطع الكروموسومية المهضومة بواسطة الانزيمين القاطعين XbaI وI Spe و ظهر الانزيم الاول تفوقا بشكل واضح حيث اعطى 16 نمطا بينما تم الحصول على 5 انماط للانزيم الثاني. اظهرت نتائج تقطيع الكروموسوم بانزيم XbaIاحتواء الانماط لعدد من الحزم تراوحت 15-2 حزمة من DNA من مجموع العزلات بحجم جزيئي يتراوح ما بين 550-50كيلو زوج قاعدي و بينت نتائج التحليل الاحصائي ان معامل التشابه Dice Coefficient كان 1- 0.13 و تم تحليل البيانات اعتماداً على الـ UPGMA نسبة التشابة %90 لسبعة مجاميع و لوحظ وجود اختلاف جيني كبير بين عزلات ا لبكتريا مع امتلاك هذه العزلات لنفس النمط المصلي خلال مدة العزل والاماكن مختلفة وهذا يدل على وجود علاقة وبائية بين العزلات. ان تقنية الترحيل الكهربائي في الحقل النابض المعتمد على هضم الدنا بواسطة انزيمين هاضمين قد اظهرت تفوقا واضحا في التفريق بين العزلات المدروسة و هذا التفوق راجع الى دراسة المقارنة لنتائج هظم الدنا بانزيمين مختلفين. وبهذا اثبتت هذه الطريقة فاعليتها كوسيلة تنميط وبائية مقارنة بالطرق الاخرى مثل الكشف عن المحتوى البلازميدي . ER -