TY - JOUR ID - TI - EXTRACTION AND PURIFICATION OF EXTRACELLULAR GLUCOSE ISOMERASE ENZYME FROM ALKALOPHILIC Bacillus sp. BC4 LOCAL ISOLATE إستخلاص وتنقية إنزيم الكلوكوزايزوميريز الخارج خلوي من العزلة المحلية Bacillus sp. BC4 المُحبة للقاعدية AU - سعد حسين خضير PY - 2010 VL - 9 IS - 3 SP - 438 EP - 446 JO - Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية SN - 18154794 25207245 AB - Alkalophilic Bacillus sp.BC4 local isolate, that was isolated from soil, was used to produce extracellular glucose isomerase enzyme, using liquid medium at initial pH of 10 supported with(10ml/l)of xylose extract from straw (H2SO4 straw hydrolysate).The Glucose isomerase enzyme was extracted by centrifugation and purified by two purification steps including fractionation with different saturation of ammonium sulfate(50, 60, 70, 80, 90%) and DEAE-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography column. The results showed that 80% saturation of ammonium sulfate gave the best activity for enzyme, where the specific activity reached to 2.61unit/mg protein and overall purification folds to 8.7 with a 78.3% recovery, while the ion exchange chromatography step using DEAE-Sepharose CL-6B column was not observed any enzymatic activity through the wash step, which indicate that most of the enzyme activity is present in the eluted parts and that the enzyme carry a negative charge under the used conditions. The effective eluted parts was collect and calculate each of specific activity was 6.2 units/mg protein and the overall purification folds were 20.6 times with a 47.5% recovery.

أُستعملت العزلة المحلية Bacillus sp. BC4 المُحبة للقاعدية والمعزولة من التربة لإنتاج إنزيم الكلوكوزايزوميريز الخارج خلوي بإستعمال وسط الأملاح المعدنية السائل ذو الرقم الهيدروجيني 10 والمدعم بوساطة ( 10 مليلتر/ لتر) مُستخلص الزايلوز من الحلفا. أُستخلص الإنزيم بالنبذ المركزي ونُقي عن طريق ترسيبه بكبريتات الأمونيوم بنسب إشباع مختلفة(50، 60، 70، 80، 90%) ثم كروموتوغرافيا التبادل الآيوني بوساطة عمود المبادل DEAE-Sepharose CL-6B. بينت النتائج أن نسبة الإشباع 80% بكبريتات الامونيوم أعطت أفضل تركيز للإنزيم، إذ بلغت الفعالية النوعية 2.61 وحدة/ملغم بروتين وبعدد مرات تنقية 8.7 مرة وحصيلة إنزيمية 78.3%، أما خطوة كروموتوغرافيا التبادل الآيوني بوساطة المبادل DEAE-SepharoseCL-6B فقد لُوحظ عدم وجود فعالية إنزيمية في مرحلة غسل العمود مما يدل على إن معظم فعالية الإنزيم تقع في الأجزاء المُستردة وأن الإنزيم يحمل شحنة سالبة في الظروف المُستعملة جعلته يرتبط بالمبادل. جُمعت الأجزاء الفعالة لمرحلة الإسترداد وحُسبت الفعالية النوعية(6.2 وحدة/ملغم بروتين) والفعالية الكلية للإنزيم وكانت عدد مرات التنقية لهذه الخطوة 20.6 مرة وبحصيلة إنزيمية مقدارها 47.5%. ER -