TY - JOUR ID - TI - Purification, characterization of thermostable Amylopullulanase from Bacillus licheniformis (BS18) by using solid state fermentation (SSF) تنقية وخصائص انزيم الاميلوبليونيز الثابت حرارياً من بكترياBacillus licheniformis Bs 18 باستخدام تخمرات الحالة الصلبة AU - Sanaa B. Aldeen سناء برهان الدين AU - Amna K. Khalaf آمنة قحطان خلف PY - 2014 VL - 11 IS - 2 عدد خاص بالمؤتمر النسوي الثاني SP - 1043 EP - 1055 JO - Baghdad Science Journal مجلة بغداد للعلوم SN - 20788665 24117986 AB - An amylopullulanase enzyme has a wide range of applications in the food processing and distillery industries, including the conversion of starch to sugers and the production of conversion syrups (maltose and fructose syrups). Amylopullulanase was purified by three stepsincluded precipitation with 40% saturation ammonium sulfate, ion exchange chromatography by DEAE- cellulose column, and gel filtration by Sephacryl S-200 column. The characteristics of purified amylopullulanase were studied. The optimum pH of enzyme activity was 7.0. It was more stable at pH 7, andthe maximum enzyme activity was observed at 70°C. The optimum thermal stability for the enzyme was at (37-50°C). The effect of some metal ions on amylopullulanase activity was determined. It was observed that 10 mM of Ca++ and Mg++ enhanced enzymes activity. Different levels of inhibition revealed when enzyme was treated with Fe++, Cu++, Zn++, and Hg++ at 5 and 10 mM. An effect of some chemical agents on purified enzyme activity was investigated. Results obtained that a slight effect the amylopullulanase activity occurred after incubation with 5, 10 of EDTA and 10mM of PMSF on amylase activity. Hence, amylopullulanase activity have increased effect after incubation with 5, 10mM of 2-mercaptoethanol, while amylopullulanase lost most of its activity after incubation with 5M of urea.

تضمنت الظروف المثلى لانتاج الانزيم amylopullulanase باستخدام وسط التخمر الصلبSSF بزرع 2 مل من العالق البكتيري المنشط على الوسط الحاوي على مخلفات الرز ومخلفات الذرة والمرطبة بمحلول الفوسفات الدارئ بنسبة ترطيب 1:2 (وزن/حجم) عندالرقم الهيدروجيني 6 لمدة 48 ساعة وحضنت في درجة حرارة 37 درجة مئوية وبلغت الفعالية النوعية لانزيم البليولنيز 33.8 وحدة /ملغم بروتين وبلغت 36.9 وحدة /ملغم للاميليزتمت تنقية الانزيم amylopullulanaseالمنتج من العزلة Bs 18 بثلاث خطوات شملت الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 40% ثم كروموتوغرافيا التبادل الايوني باستخدام عمود DEAE celluloseوالترشيح الهلامي في عمودSephacryl S-200 . حيث بلغت الفعالية النوعية للبليولنيز 47 وحدة/ ملغم بروتين والاميليز 51 وحدة / ملغم بروتين بعدد مرات تنقية 7.92 للبيلولنيز و8.2 للاميليز وبحصيلة انزيمية بلغت 37.6% للبليولنيز و38.9% للاميليز .تمت دراسة بعض صفات الانزيم المنقى وكانت قيمة الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم 7 وكان الانزيم اكثر ثباتا في ارقام هيدروجينية تراوحت بين( 7-8) وظهرت اقصى فعالية للانزيم عند درجة حرارة 70 درجة مئوية وكان الثبات الحراري الامثل للانزيم بين (37-50 ) درجة مئوية واحتفظ الانزيم باكثر من 50%من فعالية البليولنيز و80% للاميليز عند حضنه بدرجة 80 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة .درس تاثير بعض الايونات الفلزية في فعالية الانزيم amylopullulanase ولوحظ زيادة في فعالية الانزيم عند حضنه مع ايونات الكالسيوم والمغنيسيوم بتركيز 10 ملي مولار وبلغت الفعالية الانزيمية للبليولنيز154, 140% ولانزيم الاميليز144, 135%على التوالي , كما لوحظ نسب مختلفة من التثبيط تراوحت بين (1%- 38%) عند معاملته بايونات الحديد والنحاس والخارصين والزئبق.لم تظهر كل من العوامل الكلابية (العامل المخلبي EDTA ) بتركيز 10 ملي مولار والعوامل المختزلة (2- مركبتوايثاناول) و PMSF تاثيرا واضحا على فعالية الانزيم وهذا يعطي مؤشرا على ان الانزيم هو ليس من الانزيمات الفلزية ولا الكبريتية ولا السيرينية بينما اظهرت اليوريا بتركيز 5 مولار تاثيرا مثبطا للانزيم . ER -