@Article{, title={The quantification of human factor IX gene expression in transfected mammalian liver cells, employing the real time qPCR and the ELISA techniques القياس الكمي للتعبير الجيني لعامل التخثر التاسع في الانسان في خلايا كبد الثديات بتوظيف الوقت الحقيقي لتفاعلات الكوثرة الكمية و كذلك فحص الانزيم المرتبط مناعياً.}, author={Zaid Al-Obaidi زيد مهدي جابر العبيدي}, journal={kerbala journal of pharmaceutical sciences مجلة كربلاء للعلوم الصيدلانية}, volume={}, number={7}, pages={218-226}, year={2014}, abstract={Real-time qPCR and ELISA are very sensitive powerful techniques that were commonly and universally employed in the quantification of gene expression. The aim of this study has two parts; the first part is to quantify the level of the hFIX gene expression employing the real time qPCR for quantifying the newly transcribed mRNA. The second part is to detect the translated rFIX protein using the ELISA technique. In this study the mRNA levels present in mammalian liver cells (HepG2) that were transfected with hFIX gene has been successfully quantified by qPCR using hACTB as a housekeeping gene. Also the level of the translated rFIX protein has been observed utilizing the ELISA instrument. ∆Ct and ∆∆Ct for the transfected cells were -1 and -21 respectively, while the concentration of the rFIX in these cells was 5,495 ng/ml, which is more than 800 times increase when compared with the control cells. The validation of such methods, which are used for quantification of both the gene and the translated protein, is of significant importance. Furthermore the examination of the functionality of the target protein is even more important due to the challenges associated with these techniques.

الوقت الحقيقي لتفاعلات الكوثرة الكمية (rt-qPCR) و كذلك فحص الانزيم المرتبط مناعياً (ELISA) هي تقنيات قوية و حساسة للغاية و التي تم استخدامها عالميا في القياس الكمي للتعبير الجيني. الهدف من هذا العمل يمتلك جزئين: الجزء الاول هو لقياس مستوى التعبير الجيني لعامل التخثر التاسع للانسان (hFIX) بوساطة توظيف (qPCR) لقياس كمية الحمض النووي الرايبوزي الناقل (mRNA) المنسوخ حديثاً. الجزء الثاني هو لكشف بروتين عامل التخثر التاسع المركب (rFIX) المترجم باستعمال تقنية ال(ELISA). في هذه الدراسة تم قياس مستويات (mRNA) الموجودة في خلايا كبد الثدييات ( HepG2 ) و التي تم نقل عدوى جين ال( hFIX) كمياً بوساطة (qPCR) بنجاح و ذلك باستخدام hACTB كجينات التدبير المنزلي. كما تم ملاحظة مستوى بروتين rFIX و التي تم ترجمتها باستخدام جهاز ELISA. كانت قيمة ΔCt و ΔΔCt للخلايا المصابة بالعدوى بالنقل (ـ١) و (ـ٢١) على التوالي ، في حين كان تركيز rFIX في هذه الخلايا ٥،٤٩٥ نانوغرام / مل ، والتي هي أكثر ب ٨٠٠ مرة بالمقارنة مع الخلايا السيطرة. التحقق من صحة مثل هذه الأساليب ، والتي تستخدم لتقدير كل من الجينات و البروتين المترجم، له أهمية كبيرة. وعلاوة على ذلك، دراسة وظيفة البروتين المستهدف هو أكثر أهمية نظرا للتحديات المرتبطة بهذه التقنيات.} }