TY - JOUR ID - TI - Tracking of Ceotaneous Leishmaniasis by Parasitological, Molecular and Biochemical Analysis تعقب الليشمانيا الجلدية بالاختبارات التحليلية الطفيلية والجزيئية والكيموحيوية AU - Thikra Abdullah Mahmood AU - Muhsin A. Al-Dhalimi AU - Baqur A. Sultan AU - Sundus Nsaif AL- Hucheimi PY - 2015 VL - 5 IS - 1 SP - 65 EP - 74 JO - kufa Journal for Nursing sciences مجلة الكوفة لعلوم التمريض SN - 22234055 25218638 AB - Background: In areas of endemicity without sufficient laboratory infrastructure, identification of Leishmaniaparasites is useful for control and preventive plan and very important since species differentiation is instrumental in selection of optimal therapy and treatment regimens.Aim: The present study was performed to identify the species and strain of Leishmaniaparasiteisolated from different endemic areas .Materials and Methods: In a consecutive series of 126 patients referred for a suspected CL lesion during October 2010 to December 2012 in five Iraqi provinces, direct smear and culture followed by molecular and biochemical analysis were done using nested-PCR and cellulose acetate electrophoresis. Results: Direct smears revealed that 90 (71%) patients gave positive results under light microscope. Out of 126 cases,83(65%) gave positive growth in modified NNN medium and RPMI-1640 with fetal bovine serum followed by sub-culture in drosophila Schniders media. Out of 83 postive growth culture,only 52 specimens were studied by nested - PCR .It was found that 45(86.5%) cases in the generation of a 560 bp DNA and 7(13.4%)patients displayed a fragment of 750 bp, corresponding to L. major and L. tropica, respectively. Cellulose acetate electrophoresis (CAE) was performed by 4 enzyme systems (glucose phosphate isomerase, leucilphosphate, manose phosphate isomerase and 6phosphogluconate dehydrogenase). The results showed that L.major(LV39) isolate were in 20 mass cultivated cultureConclusion: Nested-PCR and cellulose acetate electrophoresis was an ideal method for discrimination of Leishmania. spp. and variants. Both L. major and L. tropica were the causative agents of cutaneous leishmaniasis but L.major was the main species in study area .Recommendations: As a result of the observations made during the whole study period, nested- PCR is very suitable method, which can be used as a basis for future applications. Opening number of research centres situated in the country offer DNA applications for so-called “parasite tracking.” Such an application is probably more relevant for epidemiological purposes than for diagnosis. (e.g., in outbreak investigations or tracking drug-resistant parasite strains). After collection in the field, samples can be simply transferred to such a centre for further analysis. More experimental studies for effective vaccine are developed for leishmaniasis.

الهدف: تشخيص الأنواع والسلالات والعتر لمسببات الليشمانيا الجلدية لمختلف المناطق الموبوئة المنهجية: أجريت الدراسة الحالية في خمسة محافظات وغطت سبعة مستشفيات كحقل للدراسة من تشرين الأول/2010 الى كانون الأول/2012، وقد أنجز فحص الترحيل الكهربائي لخلات السليلوز( Cellulose acetate electrophoresis ) في معهد (Walter Reed) للبحوث في الولايات المتحدة الأمريكية. الفحص المجهري المباشر تم بثلاثة طرق(السائل المسحوب من القرحة,خزعة الجلد وقطرات الدم المنسابة أثناء الخزعة) . تضمنت الدراسة زراعة العينات على الوسط الزرعي NNNالمحور و RPMI-1640مع مصل العجل الوليد,يتبع بزراعة العينات على الوسط الزرعي Drosophila Schneider. تعرضت هذه الدراسة للتشخيص الدقيق للطفيلي المسبب لليشمانيا الجلدية بواسطة استخدام الفحوصات الجزيئية والكيماحياتية تطرقت تلك الدراسة إلى Isoenzym profil في(20) عينة من مجموع الحالات المرضية التي أظهرت نتائج موجبة للزرع بواسطة الأوساط الزرعية وتم مقارنتها مع السلالات والعتر المصدرية باستخدام الترحيل الكهربائي لخلات السليلوز (Cellulose acetate electrophoresis)لأربعة أنزيمات (glucose phosphateisomerase,leucilphosphate,manose phosphate isomerase and 6phosphogluconate dehydrogenase) .النتائج :أظهرت نتائج الدراسة ان 90 (71%)من المرضى أعطوا نتائج موجبة عند الفحص تحت المجهر الضوئي. عند زراعة العينات على الأوساط الزرعية فوجد أن 83(65%) من العينات أعطت نتائج موجبةو بينت الدراسة بأن 52(41%) من مجموع الحالات المرضية التي أظهرت نتائج موجبة للزرع بواسطة الاوساط الزرعية درست بواسطة Nested-PCRوبأستخدام نوعين من البادئات لتحديد جنس وسلالة وعترة الطفيلي. أظهرت الدراسة 45(86,5%) من الحالات كانت L.major (560 bp) و7(13,5%) كانت L.tropica (750 bp).Isoenzymprofile في(20) عينة من مجموع الحالات المرضية التي اظهرت نتائج موجبة للزرع بواسطة الأوساط الزرعية تم مقارنتها مع السلالات والعتر المصدرية بأستخدام الترحيل الكهربائي حيث أظهرت النتائج أن L.major(LV39)وجدت في كل الحالات.الاستنتاج:يعتبر ال (nested-PCR و CAE طرق مثلى في تمييز وتشخيص أجناس الليشمانيا وأنواعها .كانت (L.major وL.tropica العوامل المسببة لليشمانيا الجلدية في حين L.major كانت النوع السائد في منطقة الدراسة.التوصيات:1-نتيجة لما تم ملاحظته في فترة الدراسة نوصي باستخدام PCR كأساس للتطبيقات المستقبلية.2 -فتح عدد من المراكز البحثية في القطر لما يسمى بتعقب الطفيلي تستخدم للأغراض الوبائية بالإضافة إلى التشخيص.3 -إجراء دراسات تجريبية للحصول على لقاح. ER -