Fulltext

Purification and determination the molecular weight and study the kinetic properties of Glucose-6-phosphate dehydrogenase from Diabetic patients

دراسة الخصائص الحركية لإنزيم [G6PD] المستخلص والمنقى من مرضى السكري وتقدير الوزن الجزيئي له

Abdulkader W. Rasheed1 عبدالقادر وائل رشيد الحمداني1 --- Firas T. Maher2 ، فراس طاهر ماهر الشمري1 --- Akeel H. Al-Aisse2 عقيل حسين العاصي2

Tikrit Journal of Pure Science مجلة تكريت للعلوم الصرفة
ISSN: 18131662 Year: 2018 Volume: 23 Issue: 3 Pages: 56-66
Publisher: Tikrit University جامعة تكريت

Abstract

This study was conducted to purifity Glucose 6-phosphate dehydrogenase from diabetic patients by gel filtration technique on Sephadex G100 and determine the molecular weight of enzyme, concentration and kinetic constant [Km, Vmax], study the effect of optimum temperature, substrate, pH. The study includes [60] patients with diabetes mellitus and [60] healthy individual as control. The activity of G6PD was measured after precipitated by [75%] Ammonium Sulfate concentration, using [Tris-HCl] buffer at pH 8.2. The specific activity was calculated [21.5UImg], total activity [706.8UI], number of purification [3.45] enzyme yield [23.188%] and enzyme activity [17.67UIml]. and the molecular weight were [57.82] k.D. The effect of substrate concentration was found to be increased with increasing substrate concentration. The optimum pH was found to be [8.4] and the optimum temperature was [38C]. Michaelis- Menten [Km] value for the enzyme was [3.33mM] and Vmax value was [0.263IUml ].

تنقية إنزيم [G6PD] من مرضى السكري باستخدام تقنية بسيطة هي الترشيح الهلامي بواسطة هلام السيفادكس G-100 وتقدير الوزن الجزيئي للأنزيم في المرضى ومقارنته مع الوزن الجزيئي ومقارنته مع النسبة الطبيعية للوزن الجزيئي وكذلك تقدير الثوابت الحركية للإنزيم وهي ثابت ميكاليس- منتن Kmوقيمة السرعة القصوى Vmax وتقدير قيم تركيز المادة الأساس ودرجة الحرارة والأس الهيدروجيني الأمثل للإنزيم. تتضمن الدراسة 60 عينة من مرضى السكري و60 عينة من الأصحاء حيث تم قياس الكلوكوز وفعالية الإنزيم في المصل وأظهرت النتائج ارتباط معنوي بين نقصان فعالية الإنزيم ومرض السكري وكذلك تم ترسيب الإنزيم باستخدام كبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع [75%] ثم بعد ذلك تم تنقية الإنزيم بتقنية الترشيح الهلامي على هلام السيفادكس G-100 واعتمادا على الطريقة ذاتها تم تقدير الوزن الجزيئي للإنزيم. تم حساب الفعالية النوعية [21.5وحدة/ملغم والفعالية الكلية [706.8 وحدة] وعدد مرات تنقية بلغت 3.45مرة والحصيلة الإنزيمية [23.188%] والفعالية الإنزيمية [17.67وحدة/مل]. وتم قياس الوزن الجزيئي باستخدام نفس الطريقة وكان مقدار الوزن الجزيئي للإنزيم [57.82] كيلو دالتون وتم قياس تأثير زيادة تركيز المادة الأساس على فعالية الإنزيم فوجد إن فعالية الإنزيم تزداد بزيادة تركيز المادة الأساس إلى أن تبلغ مستوى ثابت تتوقف فيه الفعالية عن الزيادة مهما زاد تركيز المادة الأساس وأظهر الرسم البياني بينهما بشكل قطع زائد وتم دراسة تأثير الأس الهيدروجيني على الإنزيم فوجد إن الأس الهيدروجيني الأمثل هو [8.4] وتم دراسة تأثير درجة الحرارة على فعالية الإنزيم فوجد إن درجة الحرارة المثلى لعمل الإنزيم هي [38] وتم تقدير الثوابت الحركية فوجد إن قيمة ثابت ميكاليس – منتن هو [Km=3.33mM] وكانت قيمة السرعة القصوى [Vmax=0.263IUml] .

Keywords

G6PD --- Diabetes mellitus --- Gel filtration chromatography --- molecular weight --- : أنزيم الكلوكوز 6-فوسفات --- داء السكري --- تقنية الترشيح الهلامي --- الوزن الجزيئي.