Fulltext

The Combination effects of Lectin extracted from mushroom Agaricus bisporus and Chemotherapy by Doxorubicin and Mytomycin-C in Cytotoxicity on some tumor cells in vitro

التأثير المتداخل لللكتين المستخلص من العرهون Agaricus bisporusوالعلاج الكيميائي بـ Doxorubicin و Mytomycin-C في سمية بعض الخلايا السرطانية في الزجاج in vitro

وفاء فوزي ابراهيم الموسوي --- محفوظة عباس عمران

journal of kerbala university مجلة جامعة كربلاء
ISSN: 18130410 Year: 2010 Volume: 8 Issue: 2 Pages: 101-112
Publisher: Kerbala University جامعة كربلاء

Abstract

The objective of this study was the extraction of Lectin from mushroom Agaricus bisporus (ABL) and concentrated using precipitation in Ammonium sulfate from 25-70% saturation, followed by dialysis against distilled water and PBS, and lyophilized. The cytotoxic effect of five concentration from 312.5-5000 µg/ml of ABL were studied in cytotoxicity assay ( in vitro ) of two tumor cell lines, Human epithelial cell carcinoma of larynx (Hep-2) and Murine mammary gland carcinoma (AMN3) at different exposure times 24, 48 and 72hr. The results revealed high significant differences (P ≤ 0.001) in inhibition rate (IR) of Hep-2 and AMN-3 dependent on Lectin concentration and exposure times, IR were the higher in Hep-2 at 2500 and 5000 µg/ml of Agaricus bisporus lectin (ABL) 24.5 %, 37.5% , and 37.79% , 54.72% in AMN-3 after exposure to 48 hours. The determination of apoptotic cells of Hep-2 and AMN-3 at at the highest concentration (5000) µg/ml ABL revealed significant apoptotic effect in each of (Hep-2) cell line 75.14% and (AMN3) cell line 82.6% in comparison with those of non treated (11.35, 10.82%). The combination effects of ABL ranged from 10-60 µg/ml with drugs Doxorubicin ( DOX) and Mytomycin-C ( MMC) caused increasing in Cytotoxic effect of DOX to 2.44 time in Hep-2 pretreated with 40 µg/ml ABL and 10 µg/ml DOX and 1.5 time in AMN3 pretreated with 40 µg/ml ABL and 15 µg/ml DOX. But there were no positive effects in Cytotoxicity of MMC on Hep-2 pretreated with ABL, while Cytotoxic effect was increased 2.79 time in AMN-3 cells pretreated with ABL 40 µg/ml and 5 µg/ml MMC.

استهدفت هذه الدراسة استخلاص اللكتين من العرهون(ABL) Agaricus bisporus وتركيزه بكبريتات الامونيوم بنسب اشباع تراوحت بين 25- 70% ثم ديلزة المستخلص بالماء المقطر وتجفيده، اختبر تأثير خمسة تراكيز من اللكتين ABLالمنقى جزئياً تراوحت بين 312.5 – 5000 مايكروغرام/مللتر في فحص السمية الخلوية assay) (Cytotoxicity لخطين من الخلايا الورمية وهما خط خلايا سرطان الحنجرة البشري carcinoma of Human epithelial cell larynx (Hep-2) وخط خلايا سرطان الغدة اللبنية الفأري Murine mammary carcinoma (AMN3) لثلاثة اوقات تعريض 24 و 48 و 72 ساعة. اذ سجلت نتائج تلك الاختبارات فروق معنوية عند مستوى احتمالية (P ≤ 0.01) في نسب تثبيط نمو خلايا Hep-2 و AMN-3 معتمدة على تراكيز اللكتين المستخدمة وعلى مدة التعريض ، بلغت اعلى نسبة تثبيط عند التراكيز 2500 و 5000 مايكروغرام/مللتروكانت 24.5% و 37.5 % لخلايا Hep-2 و 37.79% و54.72% لخلايا AMN-3 بعد التعريض لمدة 48 ساعة . كما حسبت نسبة الخلايا التي عانت من الموت الخلوي المبرمج لخلايا Hep-2 و AMN-3 عند التركيز الذي اظهر اعلى نسبة تثبيط نمو وهو ( 5000 مايكروغرام / مللتر) ووجدت فروق معنوية باحتمالية (P≤0.01) في عدد الخلايا التي عانت موتاً خلوياً مبرمجاً لكل من خلايا (Hep-2) بنسبة بلغت 75.14% و(AMN3) كانت النسبة 82.6% بالمقارنة مع السيطرة%11.35 %10.82 على التوالي ، ونتج من التعريض المتداخل لتراكيز متباينة من اللكتين ABL التي تسبق معاملة الخلايا الورمية بعقاري الـDOX (Doxorubicin) و (Mytomycin) MMC ازدياد التأثير السمي لعقار DOX بمقدار 2.44 مرة على خلايا Hep-2 في المعاملة المتداخلة عند تركيز 40 مايكروغرام/مللتر من ABL و 10 مايكروغرام/مللتر من DOX و 1.5 مرة لخلايا AMN-3 في المعاملة المتداخلة عند تركيز40 مايكروغرام/مللتر من ABL و 15 مايكروغرام/مللتر من DOX. ولم تسبب المعاملة لخلايا Hep-2 بـ ABL اية تأثيرات ايجابية في ازدياد التأثير السمي لعقار MMC، بينما ارتفع التأثير السمي لعقار MMC الى 2.79 مرة لخلايا AMN-3 عند المعاملة المتداخلة بـ 40 مايكروغرام/مللتر من ABL و 5 مايكروغرام/مللتر من MMC.