Fulltext

Purification and Properties of -Galactosidase From A Thermophilic Fungus Rhizmmucor Pusillus IB8.

تنقية وتوصيف انزيم بيتا – كالاكتوسيديز المنتج من عزلة محلية من العفن الآلف للحرارة العالية Rhizomucor pusillus IB8

Mohammed Omer محمد عمر --- Ghazi M Aziz غازي منعم عزيز --- Khalid Jaber Alzwany خالد جابر الزويني

Iraqi Journal of Science المجلة العراقية للعلوم
ISSN: 00672904/23121637 Year: 2013 Volume: 54 Issue: 2 Pages: 307-315
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Abstract

An extracellular -galactosidase from the thermophilic fungus Rhizomucor Pusillus IB8 has been purified via several steps included precipitation by ammonium sulphate at 80 % saturation, DEAE- Cellulose Ion exchange chromatography and gel filteration on sepharose CL-6B column. The Final purification folds and the yield of the enzyme were 42.5 and 24.8 % respectively. The purified -galactosidase has an optimum pH for its activity between 4.5 to 5, while the optimum pH for enzyme stability was between 5 to 5.5. Futhermore, it was found that the optimum temperature for its activity was 60 C°. The purified enzyme retained approximatly 98% of its original activity when incubated at 60 C° for 60 min. However, 25 % of its activity was lost when incubated for 120 min at the same tmperaure. Activation energy for conversion of the substrate ONPG to products was 6.15 Kcal / mol, whereas, for enzyme denaturation it was 99.3 Kcal / mol. The molecular weight of the purified enzyme was 232000 dalton as determined by gel filtration on sepharose CL-6B. Kinetic studies showed that the Michaelis constant (Km) and maximum velocity (Vmax) values for the purified enzyme using ONPG as a substrate were 0.46 mM and 223 μM /min respectively.

نقي أنزيم بيتا-كالاكتوسيديز الخارج خلوي والمنتج من العزلة المحلية للعفن Rhizomucor pusillus IB8 بعدة خطوات اشتملت على الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة إشباع 80 % وكروماتوغرافيا التبادل الايوني بعمود DEAE-Cellulose ، ومن ثم الترشيح الهلامي في عمود Sepharose CL– 6B وبلغ عدد مرات التنقية 42.2 مرة بحصيلة مقدارها 24.8 %. بينت نتائج توصيف الانزيم ان الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الأنزيم تراوح بين 5 -4.5 في حين كان الرقم الهيدروجيني الامثل لثبات الانزيم بين 5– 5.5 ، ان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم هي 60 م. وتبين ان الانزيم ذو ثبات حراري عال إلى حد ما اذ احتفظ الأنزيم بحوالي 98 % من فعاليته عند حضنة مدة 60 دقيقة في درجة حرارة 60 م في حين فقد حوالي 25 % عند حضنه مدة 120 دقيقة في درجة الحرارة نفسها . بلغت قيمة طاقة التنشيط لتحويل المادة الأساس ONPG إلى ناتج 6.15 كيلو سعرة/مول بينما بلغت قيمة طاقة التنشيط لمسخ الأنزيم99.3 كيلو سعرة / مول . وبلغ الوزن الجزيئي للأنزيم 232000 دالتون عند تقديرة بطريقة الترشيح الهلامي وكانت معدلات قيم ثابت ميكالس Km والسرعة القصوى Vmax للأنزيم هي 0.46 ملي مولار و 223 مايكرومولار/دقيقة على الترتيب باستخدام ONPG بوصفها مادة أساس .