Fulltext

Diagnosis of Sclerotinia sclerotiorum by using PCR and determination of oxalic acid produced under different ecological and chemical conditions.

تشخيص سلالة الفطر Sclerotinia sclerotiorum باستعمال الـ PCR وتقدير حامض الاوكزاليك المنتج تحت ظروف بيئية وكيميائية مختلفة.

بان طه محمد حيدر عبد المنعم المظفر

Euphrates Journal of Agriculture Science مجلة الفرات للعلوم الزراعية
ISSN: 38752072 Year: 2013 Volume: 5 Issue: 3 Pages: 179-192
Publisher: Al-kasim University جامعة القاسم الخضراء

Abstract

Series of Laboratory experiments were conducted in Biol.Dept.College of Education for Pure Science , Kerbala Univ. from Jan. ,2012 till Jan. ,2013.Fungal strain of Sclerotinia sclerotiorum was diagnosed for first time in Iraq of using Polymerase Chain Reaction (PCR).It was found that this strain was compatible with (MCG)strain at the frequent of 475 bp in the region of Enterbacterial Repetitive Intergenic (ERIC). In vitro produced Oxalic acid by this fungi was determined which plays an important role in virulent , activity and ability in the infection which are affected by Ecological and Chemical factors . These factors included temperature at 20,25,30 and 35 oC and pH at 3.5,5.5,7.5 and 9.5 and mineral nutrients (NH4)2SO4 , CaCO3 and K2SO4 at concentrations of 0, 103,104 and 105 mg/l of each. Oxalic acid was also determined under different concentrations of Gibberellic acid( GA3) and Salicylic acid (SA) at 0,150,200 and 250 mg /l of each. Results showed a reduction in oxalic acid produced by this fungi when temperature increased more than 25 oC giving the least value (0.0 )mg at 30 oC . The pH affected the production of oxalic acid significantly , the best pH was 5.5 giving 6.43 mg oxalic acid wherase, pH 7.5 and 9,5 gave 1.77 and 1.52 mg oxalic acid respectively . A significant difference in oxalic acid content under high concentrations of nutrient elements was detected . A reduction of oxalic acid due to (NH4)2SO4 at 104mg/l was observed giving 2.95 mg oxalic acid followed by K2SO4 giving 4.55 mg at the same concentration . Meanwhile, no oxalic acid was produced under the effect of CaCO3 at all used concentrations . Results also revealed a reduction in oxalic acid produced by this fungi under GA3 and SA effects at all concentrations used giving 0.0 mg at 250 mg /l GA3 .

اجريت سلسلة من التجارب المختبرية في مختبر الدراسات العليا ، ـقسم علوم الحياة بكلية التربية للعلوم الصرفة بجامعة كربلاء للمدة من كانون الثاني 2011لغاية كانون الثاني 2013، تم من خلالها تشخيص سلالة الفطر Sclerotinia sclerotiorum لاول مرة في العراق اعتمادا على تقانة تفاعل سلسلة البلمرة (PCR) Polymerase Chein Reaction ووجد انه مطابق للسلالة (MCG) وعند التتابع 475 bp و للمنطقة المعروفة باسم Entrobacterial Repetitive Intergenic (ERIC) . كما تم تقدير حامض الاوكزاليك المنتج من قبل الفطر خارج الجسم الحي، والذي يلعب دورا اساسيا في ضراوة الفطرونشاطه وقدرته على الاصابة بتأثير عدد من العوامل البيئية و الكيمائية ،والتي شملت درجة الحـــــرارة 20 ، 25 ، 30 و 35 oم والرقم الهيدروجيني 3.5 ، 5.5 ، 7.5 ، 9.5 والعناصر المغذية كبريتات الامونيوم NH4)2SO4) , كاربونات الكالسيوم CaCO3 و كبريتات البوتاسيوم K2SO4,بالتراكيــز 0 , 10 5 , 10 4 , 10 3 ملغم/لتر لكل منها ، وكذلك تقدير الحامض بتأثير منظمات النمو النباتية المتمثلة بحامض الجبرليك( GA3) و حامض السلساليك Salicylic Acid (SA) وبالتراكيز 0 , 200 , 150 و 250 ملغم/لتر . اظهرت نتائج تأثير العوامل البيئية و الكيمائية ،انخفاض كمية الحامض المنتج من قبل الفطر عند ارتفاع درجات الحراة الى اكثر من 25º م ، وان اعلى انتاج له كان عند درجة 25˚م بمعدل 7.46 ملغم و بلغت اقل معدلاتها 0.0 ملغم عند درجة الحرارة 30˚م. ان الـpH اثر تأثيرا معنويا في انتاج حامض الاوكزاليك , وان افضل pH لانتاج الحامض هو5.5 بكمية 6.43 ملغم ، وسجل اقل كمية من الحامض 1.77 و1.52 ملغم عند pH 7.5 و 9.5 على التوالي ، ولم يكن الاختلاف معنويا بينهما. كما تبين ان هنالك فرقا معنويا في كمية الحامض المنتج بتأثير التراكيز العالية من العناصر المغذية التي درست NH4)2SO4 ( ، K2SO4 و CaCO3 , حيث لوحظ انخفاضا في قيمة حامض الاوكزليك بتأثير NH4)2SO4) وبلغت اقل قيمة له 2.95 ملغم عند التركيز 10 4 ملغم/لتر , وتلاه في التأثير K2SO4 و بواقع 4.55 ملغم عند نفس التركيز, في حين عجز الفطر عن انتاج الحامض بتأثير CaCO3 عند التراكيز المستعملة كلها في التجربة. وبينت النتائج كذلك انخفاضا معنويا في كمية الحامض المنتج من الفطر بتأثير GA3وSA عند التراكيز 200 و 250 ملغم/لتر . وبلغ اقل معدل له 0.0 ملغم عند التركيز 250 ملغم/لتر من GA3