Fulltext

Extraction, purification and characterization of lipoxygenase from Pleurotus ostreatus.

استخلاص, تنقية وتوصيف انزيم الليبوكسيجينيز من الفطر Pleurotus ostreatus

Qabass L. Abdullah قبس لواء عبد الله --- Mona H. AL-Jibori منى حمودي الجبوري --- Sanad B. AL-Arrji سند باقر الاعرجي

Iraqi Journal of Science المجلة العراقية للعلوم
ISSN: 00672904/23121637 Year: 2014 Volume: 55 Issue: 1 Pages: 61-69
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Abstract

Lipoxygenase was extracted from the cup of Pleurotus ostreatus ( Jaq : Fr ) oyster mushroom for the first time in Iraq, and purified homogeneously through precipitation with 40% saturation of (NH4)2SO4 as a partial purification then loaded on DEAE-Cellulose (Diethyl amino ethyl Cellulose) ion-exchange chromatography column and then the highly active elution parts have been passed through gel filtration column with Sephacryl S-300 as a final purification with 804 (U/mg protein) specific activity, 11.32 fold of purification and 36.54% yield . The molecular weight of the enzyme was estimated to 74 KDa by gel filtration Sephacryl S-300 column and the isoelectric point for enzyme was 5.3. The optimal pH for lipoxygenase activity and stability were 8 and 6-8.5 respectively, and the optimal temperature for the activity and stability of the enzyme were 30 and 10-45 respectively. Also the activation energy necessary for Lipoxygenase to convert lionleic acid to product and for enzyme denaturalization were calculated to 9.674 and 28.087 Kilo calorie/mole respectively.

استخلاص إنزيم الليبوكيسجينيز من الجسم الثمري للفطر المحاري Pleurotus ostreatus ( Jaq : Fr ) لأول مرة في العراق, وتمت تنقية الأنزيم جزئيا بواسطة الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 40% ثم التنقية النهائية بتحميله في عمود التبادل الايوني DEAE-Cellulose (Diethyl amino ethyl Cellulose بعدها مررت الأجزاء المستردة ذات الفعالية العالية للانزيم في عمود الترشيح الهلامي بالسيفاكريل S-300 وكانت الفعالية النوعية للإنزيم 804 (وحدة/ملغم بروتين) منقى 11.32 مرة بحصيلة انزيمية 36.54%. كان الوزن الجزيئي للإنزيم 74 كيلودالتن بطريقة الترشيح الهلامي بعمود السيفاكريل S-300 , وعينت نقطة التعادل الكهربائي 5.3. قدرت الأس الهيدروجيني الأمثل لفعالية الانزيم وثباته 8 و 6- 8.5على التوالي , بينما كانت درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم وثباته 30 و 10-45 درجة مئوية على التوالي. وتم أيضا حساب طاقه التنشيط للإنزيم اللازمة لتحويل حامض اللينوليك إلى ناتج و طاقه التنشيط اللازمة لمسخ الإنزيم 9.674 و 28.087 كيلو سعرة/ مول على التوالي.

Keywords

Pleurotus ostreatus --- Oyster mushroom --- Purification --- Lipoxygenase.