PURIFICATION OF POLYPHENOLOXIDASE FROM(LACTUCA SERRIOLA L.) PRICKLY LETTUCE

Abstract

الخلاصة
أُستعملت طريقـة الإستخـلاص بوساطـة دارئ فوسفات الصوديوم بتركيز0.1 مولار ذي رقم هيـدروجيني مقـداره 7 والمحتوي علـى 2% مـن حـامض الاسكوربيك و1غم من مـادة (PVPP) Polyveneyl polypyrolidone للحصول على انزيمPolyphenoloxidase من نبات الخس الشوكي Prickly lettuce (Lactuca serriola L.). جرى تركيز الانزيم بإستعمال ملح كبريتات الامونيوم بنسب إشباع مقدارها 80-30%، تلاها تنقية الانزيم بإستعمال المبادل الآيوني DEAE-Sepharose والترشيح الهلامي بمادة Sephacryl S-200 للحصول على الانزيم بحصيلة مقدارها 42.05% وعدد مرات تنقية 37.84 مرة وفعالية نوعية بلغت 2312.5 وحدة/ملغم، وتم الحصول على حزمة بروتينية واحدة من خلال إجراء الترحيل الكهربائي بهـلام متعـدد الاكريل أمايد بوجود العوامل الماسخة (SDS-PAGE)، وأمتلك الانزيم نقطة تعادل كهربائي مقدارها 5.4، في حين بلغ الوزن الجزيئي للانزيم المنقى 43000 دالتون عند تقديره بوساطة الترشيح الهلامي.