The ability of four local fungal isolates for extracellular laccase production has been tested with five grams 1:1(w/v) humidified sawdust as substrate in mineral salt medium. After 21 day of incubation at 25±1 ْ C and using one mycelial plug (5mm), higher level of laccase activity (0.15U/ml) and specific activity (15U/mg) were observed by Pleurotus ostreatus in comparison with other fungal isolates. The results of optimum conditions for laccase production from selected isolate showed that, the maximum laccase activity (0.55U/ml) and specific activity (55U/mg) were obtained at moisture ratio 1:3 (w/v), using 3 mycelial plugs (5 mm), after 15 days incubation period at 25±1 ْ C. The results of phenol degradation by crud laccase revealed that, 100% degradation of phenol occurred after 24 hr of incubation at 25 ْ C using shaking water bath except at 200mg/l, the remaining phenol was 10.13%.

أختبرت قابلية أربعة عزلات فطرية محلية على انتاج اللاكيز بأستخدام 5غم من نشارة ألخشب التي تم ترطيبها بمحلول معدني بنسبة 1:1 (وزن/ حجم) كوسط للانتاج خلال 21 يوم من الحضانة بدرجة 25 ±1 مْ وبعد تلقيح الوسط بقطعة واحدة من النمو المايسيلي للفطر بحجم 5ملم. أعلى مستوى للفعالية والفعالية النوعية (0.15 وحدة/ملم) ( 15وحدة/ملغم) كانت من الفطر Pleurotus ostreatus تم تحديد الظروف المثلى لانتاج الانزيم من العزلة الفطرية المنتخبة وكانت : 1: 3 (وزن/حجم) نسبة الترطيب، ثلاثة قطع من النمو الميايسيلي بحجم 5ملم، خلال 15 يوم من ألحضانة بدرجة 25 ±1 مْ حيث بلغت قيمة الفعالية والفعالية النوعية 0.55 وحدة/ملم 55 وحدة/ ملغم على التوالي. أعطت نتائج تحلل الفينول بأستخدام مستخلص ألانزيم ألخام نسبة 100 % بعد 24 ساعة من الحضانة بدرجة حرارة 25 ْم بأستخدام الحمام المائي الهزاز، عدا عند ألتركيز 200 ملغم/لتر فأن نسبة الفينول المتبقي كانت %10.13.

Key words: Sawdust --- laccase --- Pleurotus ostreatus --- optimization --- biodegradation.

Aspergillus fumigates especially clinical isolate produces a series of toxic substances and proteinaceous hemolysin, protease and pigment like melanin which appear to act in an additive and synergic way on cells. In this study, gliotoxin, hemolysin, Protease, and Melanin were used in an experimental model to study their Cytotoxic activity by evaluating their effect on REF cell line (Rat embryonic fibroblast ), for exposure time of 24 hrs at three different concentrations of each compounds triplicate of each concentration were used, cytotoxicity of the purified compounds were active against REF cell line under study and a toxic effect was clear with a significant difference at the level of probability (p≤ 0.05) and this effect was contrasted among different concentrations for each purified compound growth inhibition of REF cell line was increase gradually with the increase of compound concentration.

الرشاشيات الدخناء وخصوصا العزلات السريرية تنتج سلسلة من المواد السامة والبروتينات المحلله للدم وانزيم البروتييز والصبغات مثل الميلانين والتي تبدوا أنها تعمل بصورة اضافية وطريقة تآزر على الخلايا. في هذه الدراسة تم استخدام سم الكلايوتوكسين, والبروتيين المحلل للدم وانزيم البروتييز والميلانيين في نموذج تجريبي لدراسة فعاليتها السمية من خلال تقييم تأثيرها على خط الخلايا الليفية الجنينية للجرذ بوقت تعرض 24 ساعة وبثلاث تراكيز مختلفة لكل مركب وبثلاث مكررات لكل منها سمية المركبات النقية قيد الدراسة فعالة والتأثير السمي واضح بفرق معنوي عند مستوى الاحتمالية(P≤0.05) تحت ظروف التجربة وكان هذا التأثير متباين بين التراكيز المختلفة لكل مركب من المركبات النقية، نسبة تثبيط نمو خط الخلايا اليفية لجنين الجرذ يزداد تدريجيا مع زيادة تركيز المركب.

Gliotoxin --- Hemolysin --- Protease --- Melanin --- Cytotoxic activity --- الكلايوتوكسين، والبروتيين المحلل للدم، انزيم البروتييز والميلانيين، الفعالية السمية

Thirty two isolates of Aspergillus fumigatus were obtained from a total of 44 samples of sputum, nose swab and tracheal aspirate from suspected patient with aspergillosis were also collected from February 2014 to June 2014. A morphological examination of A. fumigatus was first made with naked eye and at low magnification power of microscope after that detailed examination was done by measuring the dimensions of the microscopic structures, photographing the microscopic structures and using relevant literature. Results appeared conical-shaped terminal vesicles, uniseriate row of phialides on the upper two thirds of the vesicle, conidiophore stipes were short, phialides arrange uniseriate upper vesicle conidia and parallel to axis of conidiophore, produced in chains of spore basipetally from phialides, the chains of spore were borne directly in the absence of metulae and represented by septet and branching hyphae. The ability of A. fumigatus for GT production was investigated using thin layer Chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC) techniques and results showed that GT was produced by 81.25% of A. fumigatus isolates. Optimum conditions for GT production by A. fumigatus 16 (AF-16) isolate were determined by submerged fermentation using Yeast extract sucrose medium. Results indicated that AF-16 isolate was the highest GT producer on Yeast Exract Sucrose medium with inoculum size 2×107 conidium and incubation at 32ºC for 15 days and the concentration of gliotoxin was (4511µg mL-1).

جمعت عينات من المرضى المتوقع أصابتهم بداء الرشاشيات إذ حصل على 32 عزلة من مجموع 44 عينة من القشع ومسحات الانف والقصبة الهوائية للمرضى المتوقع اصابتهم بهذا الداء جمعت العينات للفترة من كانون الثاني للعام 2014 لغاية حزيران 2014.عملت فحوصات مظهرية بالعين المجردة وعلى القوة الصغرى للمجهر لفطر Aspergillus fumigatus ثم تلاها الفحص الدقيق للفطر من خلال قياس أبعاد التراكيب المجهرية وتصويرها بالاعتماد على مصادر سابقة. أظهرت النتائج بوجود تراكيب مخروطية الشكل ذات نهابة حوصلية ذات صف واحد من الفياليدات (تسمى احيانا بالذنيبات) مرتبة على الثلث الثاني من الحوصلة، يتميز الحامل الكونيدي بكونه قصير وتترتب الكونيدات على الفياليدات في أعلى الحوصلة وتكون موازية للحامل الكونيدي، وتتولد الأخيرة (الكونيدات) بشكل سلسلة من الفياليدات إذ تتولد سلسلة السبورات هذه مباشرة بغياب الذنيبات الأبتدائية اذ تتكون بحاجز وهايفات متفرعة. كشف عن قابلية Aspergillus fumigatus على إنتاج الغلايوتوكسين بإستخدام تقنية كروموتوغرافيا الطبقة الرقيقة. أظهرت النتائج قابلية 25 عزلة(81.25%) من عزلات A. fumigatusعلى إنتاج السم بينما لم تظهر عزلات الكانديدا جميعها القابليةعلى الإنتاج. تمثلت الظروف المثلى لإنتاج الغلايوتوكسين لتخمرات الحالة السائلة بإستخدام وسط خلاصة الخميرة كمادة أساس للعزلة المنتجة الأكفأ التي يرمز لهاAF-16وحجم اللقاح 2×710سبوربدرجة حرارة 32 ºم لمدة 15 يوما" إذ كان تركيزالغلايوتوكسين 4511ميكروغرام مل-1بإستخدام تقنية الكروموتوغرافيا السائلة ذات الإداء العالي.

Aspergillus fumigatus --- Mycotoxins --- Gliotoxin --- TLC --- HPLC --- Czapek-Dox broth medium --- yeast-extracted broth medium --- RPMI medium. --- المايتوتوكسينات، الفطر Aspergillus fumigatus، الغلايوتوكسين، --- TLC تقنية الكروموتوغرافيا السائلة ، وسط خلاصة الخميرة، الوسط وسط RPMI Czapek-Dox broth