research centers


Search results: Found 1

Listing 1 - 1 of 1
Sort by

Article
Biochemical Study of Alkaline Phosphatase inStaphylococcus aureus
دراسة كيموحيوية لأنزيم الفوسفاتيز القاعدي من بكتريا Staphylococcus aureus

Authors: Najwa I. Khaleel نجوى ابراهيم خليل --- Ibtihal E. Kanaan ابتهال ادريس كنعان
Journal: Rafidain journal of science مجلة علوم الرافدين ISSN: 16089391 Year: 2018 Volume: 27 Issue: 5A-Microbiology Pages: 49-64
Publisher: Mosul University جامعة الموصل

Loading...
Loading...
Abstract

The present research aimed isolating and purifying Alkaline phosphatase enzyme from crude protein extract (Lysate supernatant) of Staphylococcus aureus by using different biotechnologies. To proceed, the following steps were achieved:Firstly, The verification of the existence of enzyme in bacteria, the bacteria were diagnosed by using the API 20 stripe that consists of (20) items. It had been detected that the experimented bacterium was Staphylococcus aureus, the enzyme was isolated from this bacterium to ensure its availability in it within the logarithmic phase and this was done through growing it for 18 hours in a suitable growth medium. It had been detected that the enzyme was intracellular because of the occurrence of enzyme activity in the lysate supernatant without occurring it in the cell free culture supernatant. Secondly, Enzyme purification, the enzyme had been purified through three stages: precipitation of protein by ammonium sulphate, dialysis and finally, the protein extract was passed through column chromatography by using Sephadex G-100 gel, the estimated enzyme activity after this step was 16.2 in comparison with its activity before the purification processes (crude protein extract). The approximate molecular weight of alkaline phosphatase was estimated by using gelatinous filtration technique and it was 51.000 Dalton. Thirdly, Measuring of the enzyme activity in the experimented animals, the results showed an increase of enzyme activity in the blood serum of mice injected with pathological bacteria in comparison with its activity in the blood serum of healthy mice, i.e. the intact ones.

سعت الدراسة الحالية باستخدام التقنيات الحياتية المختلفة الى عـــــزل وتنقية إنزيم الفوسفاتيز القاعــــدي Alkaline phosphatase من المستخلص البروتيني الخام (رائق الخلايا المتكسرة) من بكتيريا Staphylococcus aureus، وذلك حسب الخطوات المدرجة في أدناه: الأولى: التحقق من وجود الانزيم في البكتيريا، اذ تم تشخيص البكتيريا باستخدام شريـــــط API20 الذي يحتوي على (20) اختباراً، وتبين لدينا ان البكـتيريا المختبرة هي Staphylococcus aureus، وتم عزل الإنزيم للتأكد من وجوده في هذه البكتيريا ضمن الطور اللوغارتمي وذلك بتنميتها لمدة 18 ساعة في الوسط الغذائي المناسب، وتبين انه من النوع الداخل خلوياﹰ بدلالة وجود فعالية للإنزيم في رائق الخلايا المتكسرة دون وجودها في الرائق الخالي من الخلايا البكتيرية. الثانية: تنقية الإنزيم، تمت عملية تنقية الإنزيم على ثلاث مراحل هي: الترسيب بكبريتات الأمونيوم، ومن ثم الفرز الغشائي وأخيرا إمراره بعمود الفصل الكروماتوغرافي باستخدام هلام السيفادكس Sephadex G -100 حيث قـدرت الفعالية النوعية بعد عملية التنقية الأخيرة بحوالي 16.2 مرة بالمقارنة مع فعاليته قبل التنقية (في المستخلص البروتيني الخام). كما تم باستخدام تقنية الترشيح الهلامي تعيين الوزن الجزيئي التقريبي لإنزيم الفوسفاتيز القاعدي الذي قدر بـ (51,000) دالتون.الثالثة: قياس فعالية الإنزيم في الحيوانات المختبرية، أظهرت النتائج وجود زيادة ملحوظة في فعالية الإنزيم في مصل دم الفئران المحقونة بالبكتيريا المرضية مقارنة بفعاليته في مصل دم الفئران السليمة (غير المحقونة).

Listing 1 - 1 of 1
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (1)


Language

Arabic (1)


Year
From To Submit

2018 (1)