research centers


Search results: Found 1

Listing 1 - 1 of 1
Sort by

Article
Cloning of Copper resistance gene (copA) that Presence in Novel Genomic Island of Acinetobacter baumannii A92
كلونه جين النحاس المتواجد في الجزيرة الوراثية الفريده المتواجدة في بكتريا Acinetobacter baumannii A92

Authors: Suhad Saad سهاد سعد محمود --- Alice k. Melconian اليس كريكور اغوب --- Ali H.Ad'hiah علي حسين دحيه --- kumar Rajakumar كومار راجا كومار
Journal: Iraqi Journal of Science المجلة العراقية للعلوم ISSN: 00672904/23121637 Year: 2014 Volume: 55 Issue: 2Supplement Pages: 722-728
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Loading...
Loading...
Abstract

This study was aimed to detect weather copA gene(copper resistance gene ) presence in A.baumannii A92 genome(AbaR genomic islands). The full genomic sequence of A.baumannii A92 not published in NCBI genome similarity was detected between two strains so the sequence of A.baumanniiIS-116(Genebank-AMGF0100000.1 ) was used to design the primers that were used for amplify of copA gene of A.baumannii A92. Two primers contain two sites for restriction enzymes (KpnI,XohI) and PWSK29 vector were used in the cloning, double digestion has been performed for vector and gene. Then the re-ligation was completed to form recombinant molecule,after that, transformation have been performed for the recombinant molecule by using chemical competent E.coli DH5α. Finally ,the transformant cells were incubated for 16-18hr at 37°C, the white positive colony that contain recombinant vector was appeared . After that, the success of cloning was confirmed by using colony PCR method for white colony by using copA-F with M13-R(universal primer) primers ,the results of colony PCR confirmed the presence of insert gene by appearing of inserted band.

اجريت الدراسه للكشف عن تواجد جين مقاومه عنصر النحاس في موروث (جينوم) بكتريا Acinetobacter baumannii A92 .بسبب عدم تواجد التتابعات الكاملة لجينومA92 A.baumannii في موقع NCBI لذلك تم الاعتماد على تتابعات بكتريا A.baumanniiIS-116 Gene bank-AMGF0100000.1 )) حيث وجد تشابه بين تتابعات المادة الوراثية للعزلتين لتصميم البادئات التي استخدمت في تضخيم الجين .حيث تم تصنيع بادئين يحتويان على موقعين للأنزيمات القاطعة (KpnI,XohI) وكذلك تم استخدام الناقل PWSK29 كناقل استنسال ،بعد اكمال عمليه الهضم للجين المراد استنساله وناقل الكلونه تم اجراء تفاعل الربط بين الجين والناقل لتكوين الجزيئه الهجينه ثم بعد ذالك تم ادخال الجزيئة الهجينة الى خلايا بكتريا E.coli DH5α المؤهلة بواسطه عمليه التحول (transformation ) واخيرا تم حضن الخلايا البكتريه المتحولة لمده 16-18 ساعه في 37 م وبعد انتهاء مده الحضن تم الحصول على خلايا بيضاء اللون الحاملة للجزيئة الهجينة .للتأكد من نجاح عمليه الاستنسال وتواجد الجزيئة الهجينة ، تم استخدام تضاعف السلسة للخلايا باستخدام بادئcop-R والبادئ العام M13-R(universal primer) وقد بينت نتائج التفاعل لل colony-PCR على الجل وجود الجين المحشور من خلال ظهور حزمه ( 2484 زوج قاعدي) الجين المحشور.

Listing 1 - 1 of 1
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (1)


Language

English (1)


Year
From To Submit

2014 (1)