research centers


Search results: Found 3

Listing 1 - 3 of 3
Sort by

Article
The quantification of human factor IX gene expression in transfected mammalian liver cells, employing the real time qPCR and the ELISA techniques
القياس الكمي للتعبير الجيني لعامل التخثر التاسع في الانسان في خلايا كبد الثديات بتوظيف الوقت الحقيقي لتفاعلات الكوثرة الكمية و كذلك فحص الانزيم المرتبط مناعياً.

Author: Zaid Al-Obaidi زيد مهدي جابر العبيدي
Journal: karbala journal of pharmaceutical sciences مجلة كربلاء للعلوم الصيدلانية ISSN: 70272221 Year: 2014 Issue: 7 Pages: 218-226
Publisher: Kerbala University جامعة كربلاء

Loading...
Loading...
Abstract

Real-time qPCR and ELISA are very sensitive powerful techniques that were commonly and universally employed in the quantification of gene expression. The aim of this study has two parts; the first part is to quantify the level of the hFIX gene expression employing the real time qPCR for quantifying the newly transcribed mRNA. The second part is to detect the translated rFIX protein using the ELISA technique. In this study the mRNA levels present in mammalian liver cells (HepG2) that were transfected with hFIX gene has been successfully quantified by qPCR using hACTB as a housekeeping gene. Also the level of the translated rFIX protein has been observed utilizing the ELISA instrument. ∆Ct and ∆∆Ct for the transfected cells were -1 and -21 respectively, while the concentration of the rFIX in these cells was 5,495 ng/ml, which is more than 800 times increase when compared with the control cells. The validation of such methods, which are used for quantification of both the gene and the translated protein, is of significant importance. Furthermore the examination of the functionality of the target protein is even more important due to the challenges associated with these techniques.

الوقت الحقيقي لتفاعلات الكوثرة الكمية (rt-qPCR) و كذلك فحص الانزيم المرتبط مناعياً (ELISA) هي تقنيات قوية و حساسة للغاية و التي تم استخدامها عالميا في القياس الكمي للتعبير الجيني. الهدف من هذا العمل يمتلك جزئين: الجزء الاول هو لقياس مستوى التعبير الجيني لعامل التخثر التاسع للانسان (hFIX) بوساطة توظيف (qPCR) لقياس كمية الحمض النووي الرايبوزي الناقل (mRNA) المنسوخ حديثاً. الجزء الثاني هو لكشف بروتين عامل التخثر التاسع المركب (rFIX) المترجم باستعمال تقنية ال(ELISA). في هذه الدراسة تم قياس مستويات (mRNA) الموجودة في خلايا كبد الثدييات ( HepG2 ) و التي تم نقل عدوى جين ال( hFIX) كمياً بوساطة (qPCR) بنجاح و ذلك باستخدام hACTB كجينات التدبير المنزلي. كما تم ملاحظة مستوى بروتين rFIX و التي تم ترجمتها باستخدام جهاز ELISA. كانت قيمة ΔCt و ΔΔCt للخلايا المصابة بالعدوى بالنقل (ـ١) و (ـ٢١) على التوالي ، في حين كان تركيز rFIX في هذه الخلايا ٥،٤٩٥ نانوغرام / مل ، والتي هي أكثر ب ٨٠٠ مرة بالمقارنة مع الخلايا السيطرة. التحقق من صحة مثل هذه الأساليب ، والتي تستخدم لتقدير كل من الجينات و البروتين المترجم، له أهمية كبيرة. وعلاوة على ذلك، دراسة وظيفة البروتين المستهدف هو أكثر أهمية نظرا للتحديات المرتبطة بهذه التقنيات.


Article
The Qualification and Quantification of Caffeine in Two Different Caffeinated Pharmaceutical Formulas Employing RP-HPLC Technique.
القياس النوعي و الكمي للكافيين في مستحضرين صيدلانيين مختلفين محتويين على الكافيين بتوظيف تقنية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الاداء-الطور العكوس.

Author: Zaid Al-Obaidi زيد مهدي جابر العبيدي
Journal: Albahir journal مجلة الباهر ISSN: 23125721 Year: 2015 Volume: 2 Issue: 3,4 Pages: 76-89
Publisher: AL-Abbas Holy Shrine العتبة العباسية المقدسة

Loading...
Loading...
Abstract

Abstract Background: Method optimization of drug analysis is an arising approach among multidisciplinary science fields. The High performance liquid chromatography (HPLC) has been approved to be the cornerstone of drug analysis. Over the last ten years, HPLC has been figured as the analysis method of choice for many compounds. HPLC system has been utilized in diversified applications such as: the quantitative/qualitative analyses of biological samples, calculating the amounts of active pharmaceutical ingredient (API), isolating specific components from their mixtures, and many others. This work aims to qualify and quantify the caffeine in two different pharmaceutical formulas namely; Panadol® Extra tablets and Thicker Fuller Hair® shampoo employing RP-HPLC. Methods: Isocratic method was utilized with fixed mobile phase ratio as methanol: water (40:60). The flow rate was 0.8 ml/min while the wavelength was 273nm. Calibration curve was plotted via the utilization of the following concentrations (0.0, 20, 40, 60, and 80) µg/ml. Thirty six caffeinated tablet samples were examined as dissolved by methanol and filtered with 0.22 µm nylon-membrane syringe filter and diluted. On the other hand three independent caffeinated shampoo samples were examined. The samples were diluted, shacked, and filtered with 0.22 µm nylon-membrane syringe filters. Finally, the diluted solutions were injected to the RP-HPLC and the data was observed and recorded. Results: The areas required to plot the calibration curve were observed. The caffeine peak was identified within each pharmaceutical sample. Consequently the identified peaks were also quantified. The mean content of caffeine in caffeinated tablets was found to be 64.96 mg. Moreover, the caffeine concentration in the shampoo was observed as 0.0047%. Discussion and conclusion: In this work the RP-HPLC has been utilized in the qualification and quantification of caffeine in two different pharmaceutical formulas namely; Panadol® Extra tablets and Thicker Fuller Hair® shampoo. HPLC technology has matured to the extent that almost any existing drug can be analyzed by an existing method that can be found in the analytical literatures. For future work other drugs can be examined or even multidrug formulas can be tried with such accurate and precise RP-HPLC technique.

ﺍﳋﻼﺻﺔ ﺧﻠﻔﻴﺔ: ﺗﻜﺎﻣﻞ ﻃﺮﻳﻘﺔ ﻟﻠﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﺪﻭﺍﺋﻲ ﻫﻮﳖﺞ ﻣﺘﺼﺎﻋﺪ ﺑﲔ ﳎﺎﻻﺕ ﺍﻟﻌﻠﻮﻡ ﻣﺘﻌﺪﺩﺓ ﺍﻟﺘﺨﺼﺼﺎﺕ. ﺍﻥ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﻗﺪ ﺍﺛﺒﺘﺖ ﻟﺘﻜﻮﻥ ﺣﺠﺮ ﺍﻟﺰﺍﻭﻳﺔ ﰲ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﺪﻭﺍﺋﻲ. ﺧﻼﻝ ﺍﻟﻌﻘﺪ (HPLC)ﺍﻟﻜﺮﻭﻣﺎﺗﻮﻏﺮﺍﻓﻴﺎ ﺍﻟﺴﺎﺋﻠﺔ ﻋﺎﻟﻴﺔ ﺍﻷﺩﺍﺀ ﺗﻢ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻪ (HPLC) ﺍﻟﻄﺮﻳﻘﺔ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ﺍﳌﺨﺘﺎﺭﺓ ﻟﻠﻌﺪﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﳌﺮﻛﺒﺎﺕ. ﺍﻥ ﻧﻈﺎﻡ (HPLC)ﺍﳌﻨﴫﻡ ﺗﻘﺮﺭ ﺍﻥ ﻳﻜﻮﻥ ﰲ ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﻣﺘﺸﻌﺒﺔ ﻣﻨﻬﺎ: ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻼﺕ ﺍﻟﻜﻤﻴﺔ /ﺍﻟﻨﻮﻋﻴﺔ ﻟﻠﻌﻴﻨﺎﺕ ﺍﻟﺒﺎﻳﻠﻮﺟﻴﺔ، ﺍﳊﺴﺎﺏ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻠﻤﺤﺘﻮ￯ ﺍﻟﺼﻴﺪﻻﲏ ﺍﻟﻔﻌﺎﻝ، ﻋﺰﻝ ﺍﳌﺮﻛﺒﺎﺕ ﻣﻦ ﳐﺎﻟﻴﻄﻬﺎ، ﻭﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﺎﺕ ﺍﺧﺮ￯ ﻋﺪﻳﺪﺓ. ﻫﺬﺍ ﺍﻟﻌﻤﻞ ﳞﺪﻑ ﻟﻠﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻨﻮﻋﻲ ﻭﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻠﻜﺎﻓﻴﲔ .(RP-HPLC) ﺷﺎﻣﺒﻮﺑﺘﻮﻇﻴﻒ ﺗﻘﻨﻴﺔ “ﺛﻜﺮ ﻓﻠﺮ” ﻭ“ﺑﻨﺎﺩﻭﻝ ﺍﻛﺴﱰﺍ”ﰲ ﻣﺴﺘﺤﴬﻳﻦ ﺻﻴﺪﻻﻧﻴﲔ ﳘﺎ ﺑﺎﻻﺳﻢ؛ ﺍﻗﺮﺍﺹ . ﻭﻛﺎﻥ ﻣﻌﺪﻝ (40:60)ﻃﺮﻕ ﺍﻟﻌﻤﻞ: ﺗﻢ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﻃﺮﻳﻘﺔ ﺍﻟﻄﻮﺭ ﺍﻟﺜﺎﺑﺖ ﻣﻊ ﻧﺴﺒﺔ ﺛﺎﺑﺘﺔ ﻟﻠﻨﺎﻗﻞ ﻛﲈ ﰲ ﺍﳌﻴﺜﺎﻧﻮﻝ: ﺍﳌﺎﺀ ﻧﺎﻧﻮﻣﱰ. ﻭﻗﺪ ﺭﺳﻢ ﻣﻨﺤﻨﻰ ﺍﳌﻌﺎﻳﺮﺓ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻖ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺗﺮﻛﻴﺰﺍﺕ ﺍﻟﺘﺎﻟﻴﺔ 273 ﻣﻞ /ﺩﻗﻴﻘﺔ ﺑﻴﻨﲈ ﻛﺎﻥ ﺍﻟﻄﻮﻝ ﺍﳌﻮﺟﻲ 0.8ﺗﺪﻓﻖ ﻣﻴﻜﺮﻭﻏﺮﺍﻡ /ﻣﻞ. ﺗﻢ ﻓﺤﺺ ﻋﻴﻨﺎﺕ ﺳﺘﺔ ﻭﺛﻼﺛﲔ ﺣﺒﺔ ﺩﻭﺍﺀ ﲢﺘﻮﻱ ﻋﲆ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﻛﲈ ﺍﺫﻳﺒﺖ ﰲ (0.0, 20, 40, 60 ﻭ80) ﻣﻴﻜﺮﻭﻣﱰ ﻓﻠﱰ ﻏﺸﺎﺀ ﺍﻟﻨﺎﻳﻠﻮﻥ ﺫﻱ ﺍﳊﻘﻨﺔ. ﻣﻦ ﻧﺎﺣﻴﺔ ﺃﺧﺮ￯ ﺗﻢ ﻓﺤﺺ ﺛﻼﺙ 0.22ﺍﳌﻴﺜﺎﻧﻮﻝ ﻭﺗﻢ ﺗﺼﻔﻴﺘﻬﺎ ﺑﻮﺳﺎﻃﺔ 0.22ﻋﻴﻨﺎﺕ ﻣﺴﺘﻘﻠﺔ ﻟﻠﺸﺎﻣﺒﻮﻭﺍﻟﺘﻲ ﲢﺘﻮﻱ ﻋﲆ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ. ﻭﺧﻔﻔﺖ ﺍﻟﻌﻴﻨﺎﺕ، ﺭﺟﺖ، ﻭﺗﻢ ﺗﺼﻔﻴﺘﻬﺎ ﻣﻊ ﻣﺮﺷﺤﺎﺕ ﺣﻘﻨﺔ ﻭﻗﺪ ﻟﻮﺣﻈﺖ ﺍﻟﺒﻴﺎﻧﺎﺕ ﻭﺗﻢ ﺗﺴﺠﻴﻠﻬﺎ.(HPLC)ﻣﻴﻜﺮﻭﻣﱰ ﺫﺍﺕ ﻏﺸﺎﺀ ﺍﻟﻨﺎﻳﻠﻮﻥ. ﻭﺃﺧﲑﺍ، ﺗﻢ ﺣﻘﻦ ﺍﳌﺤﺎﻟﻴﻞ ﺍﳌﺨﻔﻔﺔ ﺇﱃ ﻧﺘﺎﺋﺞ: ﻭﻗﺪ ﻟﻮﺣﻆ ﺍﳌﺠﺎﻻﺕ ﺍﳌﻄﻠﻮﺑﺔ ﻟﺮﺳﻢ ﻣﻨﺤﻨﻰ ﺍﳌﻌﺎﻳﺮﺓ. ﻭﻗﺪ ﺗﻢ ﲢﺪﻳﺪ ﺫﺭﻭﺓ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﰲ ﻛﻞ ﻋﻴﻨﺔ ﺻﻴﺪﻻﻧﻴﺔ. ﻭﺑﻨﺎﺀ ﻋﲆ ﺫﻟﻚ ﺗﻢ ﲢﺪﻳﺪ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﻘﻤﻢ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﻢ ﲢﺪﻳﺪﻫﺎ. ﺗﻢ ﺍﻟﻌﺜﻮﺭ ﻋﲆ ﳏﺘﻮ￯ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﰲ ﺃﻗﺮﺍﺹ ﲢﺘﻮﻱ ﻋﲆ ﻣﺎﺩﺓ .0.0047٪ ﻣﻠﻎ. ﰲ ﺣﲔ ﻟﻮﺣﻆ ﺗﺮﻛﻴﺰ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﰲ ﺍﻟﺸﺎﻣﺒﻮ64,96ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﻟﺘﻜﻮﻥ ﺍﻟﻄﻮﺭ ﺍﻟﻌﻜﻮﺱ ﻟﻠﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻨﻮﻋﻲ ﻭﺍﻟﻜﻤﻲ HPLC ﺍﳌﻨﺎﻗﺸﺔ ﻭﺍﻻﺳﺘﻨﺘﺎﺝ: ﰲ ﻫﺬﺍ ﺍﻟﻌﻤﻞ ﺗﻢ ﺍﻻﺳﺘﻔﺎﺩﺓ ﻣﻦ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟـ Thicker Fuller ﻭﺷﺎﻣﺒﻮﺍﻟـ Panadol® Extraﳌﺎﺩﺓ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﲔ ﰲ ﻣﺴﺘﺤﴬﻳﻦ ﺻﻴﺪﻻﻧﻴﲔ ﳐﺘﻠﻔﲔ ﳘﺎ ﺑﺎﻻﺳﻢ؛ ﺍﻗﺮﺍﺹ ﺍﻟـ ﻟﺪﺭﺟﺔ ﺃﻥ ﺃﻱ ﺩﻭﺍﺀ ﻣﻮﺟﻮﺩ ﺗﻘﺮﻳﺒﺎ ﻳﻤﻜﻦ (HPLC). ﻗﺪ ﻧﻀﺠﺖ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﻜﺮﻭﻣﺎﺗﻮﻏﺮﺍﻓﻴﺎ ﺍﻟﺴﺎﺋﻠﺔ ﻋﺎﻟﻴﺔ ﺍﻷﺩﺍﺀ Hair® ﲢﻠﻴﻠﻪ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻄﺮﻕ ﺍﻟﻘﺎﺋﻤﺔ ﺍﻟﺘﻲ ﻳﻤﻜﻦ ﺍﻟﻌﺜﻮﺭ ﻋﻠﻴﻬﺎ ﰲ ﺍﻻﺩﺑﻴﺎﺕ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ. ﻟﻠﻌﻤﻞ ﺍﳌﺴﺘﻘﺒﲇ ﻳﻤﻜﻦ ﻓﺤﺺ ﺃﺩﻭﻳﺔ ﺃﺧﺮ￯ ﺃﻭﻳﻤﻜﻦ ﻓﺤﺺ ﺣﺘﻰ ﺍﻟﱰﻛﻴﺒﺎﺕ ﺫﺍﺕ ﺍﻷﺩﻭﻳﺔ ﺍﳌﺘﻌﺪﺩﺓ ﻣﻊ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﺪﻗﻴﻘﺔ ﻭﺍﳌﻀﺒﻮﻃﺔ.


Article
Optimisation of Standard PCR Programme
تكامل برنامج تفاعلات الكوثرة القياسي.

Author: Zaid Al-Obaidi زيد مهدي جابر العبيدي
Journal: karbala journal of pharmaceutical sciences مجلة كربلاء للعلوم الصيدلانية ISSN: 70272221 Year: 2015 Issue: 10
Publisher: Kerbala University جامعة كربلاء

Loading...
Loading...
Abstract

PCR is a very sensitive technique that gained its significance through the high contribution ona variety of bioscience fields. It is not surprising that the most cited scientific paper inbiosciences is related to the PCR programme. The optimisation of the PCR is very importantto achieve amplification with reliable results. Variables like Mg++ concentration, templateDNA dilution, annealing temperature, and primers' concentration were optimized usingclassical and touchdown amplification methods. Other PCR methods like hot-start canimprove the quality and the quantity of the PCR yield. The utilization of mathematical andstatistical ways in designing a PCR programme like Taguchi or chessboarding methods canefficiently enhance the PCR reaction. Also the usage of very pure reagents and the utilizationof a suitable kind of the Taq polymerase would highly improve future experiments. This workwas performed to find the optimal reaction conditions for the utilized standard PCRprogramme.

هي تقنية حساسة جدا و التي كسبت أهميتها من خلال المساهمة العالية على مجموعة متنوعة من (PCR) تفاعلات الكوثرةمجالات العلوم الحيوية. فإنه ليس من المستغرب أن الورقة العلمية الأكثر ذكرا في العلوم البيولوجية هي المتعلقة ببرنامجمهم جدا لتحقيق التضخيم مع نتائج يمكن الاعتماد عليها. المتغيرات مثل تركيز آيونات PCR وتعظيم الاستفادة من .PCRودرجة الحرارة التصلب، وتم تكامل تركيز البوادئ باستخدام الأساليب الكلاسيكية ، DNA المغنيسيوم ، تخفيف قالب الاستخدام .PCR مثل البداية-الساخنة يمكنها تحسين نوعية وكمية الناتج لل PCR والهبوطية للتضخيم. طرق اخرى للأو طريقة الشطرنج (Taguchi) مثل طريقة تاجوشى PCR الطرق الرياضية والإحصائية في تصميم برنامجيمكن أن تعزز كفاءة تفاعلات الكوثرة. أيضا استخدام كواشف نقية جدا واستخدام نوع مناسب من (chessboarding)يمكنها أن تحسن بشكل كبير التجارب المستقبلية. تم تنفيذ هذا العمل للعثور على ظروف (Taq polymerase) انزيمالقياسي المستخدم. PCR التفاعل الأمثل لبرنام

Listing 1 - 3 of 3
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (3)


Language

English (3)


Year
From To Submit

2015 (2)

2014 (1)