research centers


Search results: Found 3

Listing 1 - 3 of 3
Sort by

Article
SEQUENCES AND EXPRESSION OF THE ACTIVE LYSOSTAPHIN GENE FROM STAPHYLOCOCCUS SIMULANS ISOLATED OF BOVINE MASTITIS AND ITS BACTERICIDAL EFFECT ON Staphylococcus Aureus
تحديد تسلسل وتعبير جين اللايسوستافين من

Author: Jalal Y. Mustafa
Journal: Iraqi Journal of Biotechnology المجلة العراقية للتقانات الحياتية ISSN: 18154794 Year: 2012 Volume: 11 Issue: 2 Pages: 321-339
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Loading...
Loading...
Abstract

Sixty milk samples were recovered from cows suffering from clinical mastitis in Basra. Among these 55 (91.66%) gave good growth in blood agar. After microscopical and biochemical tests, 49 isolates have been diagnosed as G+ bacteria staphylococci. Thirty (50%) isolates of S. aureus are coagulase positive staphylococci (CoPS) and 19 (31.66%) isolates were coagulase negative staphylococci (CoNS). Among the recovered isolates, two isolates are S. simulans and only one gave good antimicrobial activity against S. aureus on the basis of inhibition zone. The active lysostaphin gene with determined size and sequences are 738 bp was isolated and then cloned to E. coli. A lysostaphin gene was prepared with terminal Histidine group in order to isolate and purify lysostaphin protein by used special primers. His-tag column was chosen for isolation and purification of protein with in short time. A high fidelity in running, one band of protein in polyacrylamide gel was seen in comparison with standard protein from Sigma which gave more than two bands, after running in polyacrylamide gel, the molecular weight was about 27 KDa. The antibacterial effect of lysostaphin against S. aureus was studied in Vitro which gave good inhibition zone on sold media. The LD50 of lysostaphin was determined and there were no effects of lysostaphin on mice with all concentrations used. The effect of lysostaphin against S. aureus in Vivo was studied by inducible infection in mammary glands (mastitis). The antibacterial activity of lysostaphin showed significant effect. Finally the histological studies of mammary glands showed the significant activities of lysostaphin to inhibit the growth of S. aureus. To eliminate the antibiotics resistant building this study is conducted. The aims of the study: Isolation and identification of Staphylococcus simulans as a source of lysostaphin producer from mastitis cows. Cloning the lysostaphin gene, using expression of this gene as bactericidal effect on S. aureus in plate. Screening the effect of lysostaphin on induced infected mice (locally) with S. aureus.

جمعت 60 عينة حليب من أبقار مصابة بالتهاب الضرع السريري في محافظة البصرة. وجد إن 55 عينة بنسبة (91.66%) أعطت نمو بكتيرياً على وسط أكار الدم، وبعد التشخيص المجهري والكيموحيوي تم تشخيص 49 عزلة (81.66%) لجراثيم المكورات العنقودية الموجبة لصبغة كرام، 30 عزله (50%) S. aureus موجبة لإختبار التجلط و19 عزله (31.66%) مكورات عنقودية سالبة لإختبار التجلط. حددت منها عزلتان لبكتريا S. simulans ، أعطت واحدة منها فعاليه تثبيطية لبكتريا S. aureus. عزل جين اللايسوستافين الفعال وحدد حجمه البالغ 738 زوج قاعدي، كما تم تحديد تتابعه و كلونته إلى بكتريا E. coli ودراسة تأثير البكتريا المتحولة بالجين الفعال على بكتريا S. aureus . بعد ذلك تم تحضير جين لايسوستافين حاوي على مجموعة هستدين طرفيه لغرض العزل والتنقية بإستعمال برايمرات خاصة ثم إستنساله، عزل بروتين اللايسوستافين بإستعمال عمود الهس تاك الذي أظهر كفاءة عالية جداً بالعزل والتنقية بفترات زمنية قصيرة، وقد ظهر ذلك جلياٌ عند ترحيل البروتين على هلام الأكريل أمايد، إذ ظهرت حزمة واحدة مقارنة مع البروتين القياسي من شركة سكما الذي أعطى أكثر من حزمتين عند الترحيل، وبعد ترحيله على هلام الأكريل أمايد تم تحديد تركيزه و تتابعه وحجمه الذي بلغ حوالي 27 كيلو دالتون. تم إستعمال البروتين المنقى كمضاد بكتيري لبكتريا S. aureus وذلك بدراسة تأثيره القاتل لها خارج النظام الحي فأعطى مقدرة واضحة لقتل بكتريا S. aureus . بعد ذلك تم تحديد الجرعة نصف القاتلة للبروتين المنقى (LD50) وذلك بإصابة 30 فأر، وأشارت النتائج إلى عدم ظهور أي نسبة قتل للفئران مع كل التخافيف المُستعملة دلالة على سلامة الحيوان المحقون بالبروتين المنقى. كذلك تمت دراسة تأثير البروتين المعزول على بكتريا S. aureus في داخل النظام الحي وذلك بإحداث إصابة تجريبية موضعيه وذلك بإحداث التهاب ضرع تجريبي، تمت معالجة الحيوانات المصابة بالبروتين المعزول والمنقى، أوضحت النتائج التأثير الكبير للايسوستافين الذي منع أي تأثير على الحيوان بعد حقنه، كما تم عزل الغدد اللبنية وعمل تقطيع نسيجي لنسيجها، وأظهر بروتين اللايسوستافين فعالية مميزة وواضحة في القضاء على تأثير بكتريا S. aureus المتسببة بإحداث الإصابة.


Article
Study the effect of Lysostaphin, on methicillin resistant Staphylococcus aureus( MRSA) biofilm formation
دراسة تاثير اللايسوستافين على قابلية المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين على تكوين البايوفلم( MRSA)

Authors: Elaf B. Nori AL-Sheikh ايلاف باسم نوري الشيخ --- Hana S. Yosif هناء سليم يوسف
Journal: Iraqi Journal of Science المجلة العراقية للعلوم ISSN: 00672904/23121637 Year: 2014 Volume: 55 Issue: 1 Pages: 93-100
Publisher: Baghdad University جامعة بغداد

Loading...
Loading...
Abstract

This study included collection of 100 specimens from patients in AL-Kindy Teaching Hospital and teaching laboratories of Medical City Hospitals in Baghdad during the period from August to December 2012 ,these specimens differed in their sources which included 19 nasal swab, 16 wound swab,27 burn swab, 7 pus, 15 sputum, 10 corneal swab and 6 urine . Only 38 (38%) isolates was identified as Staphylococcus. In this study, 29 isolates (76.3%) were coagulase-positive (COPS), while only 9 isolates(23.6%) were coagulase negative (CONS), from total 38 isolates of Staphylococci. The distribution of Methicillin resistance among Staphylococcus spp. was investigated by disc diffusion method. In this study, 21 isolates (55.26%) showed resistant to the Methicillin while 17 isolates (44.73%) were sensitive. The ability to produce slime layer by MRSA isolates was also investigated and the results showed that all isolates of MRSA was produced slime layer when tested by tube method, but the amounts of adherent materials were differ among the isolates. However, the results by Congo red agar method showed that 57% of MRSA isolates produced strong slime layer and 43% of MRSA obtained negative result. Similarly the ability of MRSA to produce biofilm by tissue culture plate (TCP) was investigated and the results indicated that MRSA isolates showed highly and strong biofilm formation, and the OD value of biofilm formation ranged between 0.262 - 0.311. Additionally the OD value of biofilm formation significantly increased in addition of 1% glucose to the media. Statistical analysis showed slightly effect of lysostaphin under (5.625µg/ml MIC) on biofilm formation ability of (MRSA S3) optical density was reduced to (0.312 nm) in comparable with control group (0.389nm).

شملت هذه الدراسة جمع 100عينة سريريه من المرضى الراقدين في مستشفى الكندي التعليمي و المختبرات التعليمية لمدينة الطب في بغداد للفترة من حزيران ولغاية كانون الاول 2012.هذه العينات توزعت بين مسحات( للأنف (19), للجروح (16), الحروق (27) ,التقيحات (7), القشع (15 ), القرنية (10) ,والادرار(6). وتم تحديد 38 عزلة (38٪) تعود الى جنس .S.aureusوجد ان 29 عزلة (76.3٪) منها كانت موجبة لفحص اللأنزايم المخثر للبلازما Coagulase-Positive Staphylococci] (COPS)[ في حين اظهرت 9(23.6٪) نتيجة سالبة اتجاه هذا الفحص Coagulase-Negative] Staphylococci(CONS) .[ تم التحري عن مقاومة العزلات للمضادات الحيوية بواسطة طريقة الانتشار القرص على الاكار الصلب وقد اظهرت الدراسة ان (55.26٪) من العزلات كانت مقاومة للمثسلين في حين ان (44.73٪) من العزلات كانت حساسة تجاه هذا المضاد. وقد تم التحري عن قابلية العزلات MRSAعلى إنتاج الطبقة اللزجة وأظهرت النتائج أن جميع العزلات MRSAلها القابلية على انتاج الطبقة اللزجة عند اختباره بواسطة طريقةالانابيب باختلاف كمية المواد الملتصقة بين العزلات . ومع ذلك، أظهرت النتائج وفقا لطريقة اكار الاحمر الكونغو أن 57٪ من MRSA كانت لها قابلية قوية على تكوين الطبقة اللزجة و 43٪ من MRSA اعطت نتيجة سالبة . وبالمثل تم التحري عن قابلية MRSA على انتاج البايوفلم بواسطة الطبق الزرعي النسيجي (TCP) وأشارت النتائج إلى أن العزلات MRSA لها القابلية العالية والقوية على تكوين البايوفلم وقيمة OD من تشكيل بايوفلم تراوحت بين(0.262-0.311). بالإضافة إلى ذلك اظهرت زيادة كبيرة في قيمة OD لتكوين بايوفلم عند إضافة 1٪من الكلوكوزالى الوسط. أظهر التحليل الإحصائي تاثير قليل للايسوستافين تحت تركيز (5.625مايكروغرام/مل) على قابلية (MRSA -S3) على تكوين البايوفلم حيث انخفضت قراءة (OD)إلى (0.312 نانومتر) مقارنة بمجموعة السيطرة (0.389نانومتر ).

Keywords

lysostaphin --- S.aureus --- biofilm --- MRSA


Article
دراسة الظروف المثلى لانتاج إنزيم اللايسوستافين من بكتيريا Staphylococcus sp.YZ14 المعزولة محلياً

Authors: عزيز ياسر العذاري --- غازي منعم عزيز --- ماجد حسين الجيلاوي
Journal: journal of kerbala university مجلة جامعة كربلاء ISSN: 18130410 Year: 2007 Volume: 5 Issue: 4 Pages: 571-582
Publisher: Kerbala University جامعة كربلاء

Loading...
Loading...
Abstract

Staphylococci considered as the main source to produce Lysostaphin enzyme (EC 3.4.99.17). The enzyme is one of the factors that maintain ecological equilibrium between specieses belonging to this bacterial genus ,It has the ability to lyses bacterial cell wall by breaking down peptide bonds that build up the cross bridges in peptidoglycan layer.The ability of 112 isolates of the genus Staphylococcus Spp. were tested to produce lysostaphin enzyme, using solid and submerged culture media in primary and secondary screening ,then the optimal conditions for producing enzyme were determined such as source ofcarbon, nitrogen, phosphorus, concentration and type of salts,pH,tempreture and fermentation time .The isolate Staphylococcus sp.YZ14 was selected for it`s high ability to produce enzyme and some of it’s identificational characteristics were detected .The optimum conditions for lysostaphin production from YZ14 isolate were 6% casien hydrolysate, 0.25%potassium phosphate , 0.5% sodium chloride at initial PH of 7 and after 14 hours of inocubation at 37 C.

تعد بكتريا المكورات العنقودية المصدر الرئيس لانتاج أنزيم اللايسوستافين 73.4.99.1 EC. لان الاخير يعد من العوامل التي تعمل على حفظ التوازن البيئى بين الانواع التابعة لهذا الجنس أذ يمتلك القابلية على تحليل جدرانها الخلويه وذلك بمهاجمة الاصرة الببتيدية الرابطة التي تشكل الجسور العرضيه في طبقه الببتيدوكلايكان . أختبرت قدرة 112 عزلة بكتيرية محلية تعود لجنسSpp. Staphylococcus على انتاج انزيم اللايسوستافين باستخدام الاوساط الصلبة و المزارع المغمورة في مرحلتي الغربله الاولية والثانوية،وثم تحديد الظروف المثلى لانتاج الانزيم منها تحديد المصدر الكربوني و النتروجيني و الفسفور و تعيين نوع و تركيز الملح الامثل و الأس الهيدروجيني و درجة الحرارة و فترة التخمير. أختيرت العزله Staphylococcus sp.YZ14 لكونها الاغزر انتاجا للا نزيم وأجري عدد من الفحوص التشخيصية عليها فكانت مخمرة لبعض السكريات و منتجة لكل من أنزيم محلل الدنا بنوعيه والأسيتوين و الهيمولايسن و الكوأكيوليز المرتبط والحر كما تمتلك القدرة على النمو في مدى حراري (15- 45) ْم ، أما الظروف المثلى لانتاج اللايسوستافين منها فكانت استخدام كل من متحلل الكازين 6% و فوسفات البوتاسيوم 0.25% و كلوريد الصوديوم 0.5%عند رقم هيدروجيني أبتدائي مقداره 7.0 و بعد 14 ساعة من الحضن عند درجة حرارة 37 ْم .

Listing 1 - 3 of 3
Sort by
Narrow your search

Resource type

article (3)


Language

English (2)

Arabic (1)


Year
From To Submit

2014 (1)

2012 (1)

2007 (1)